【摘 要】
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研究背景脑卒中是全球第二大致死和第三大致残原因,缺血性脑卒中在脑卒中中占比80%。缺血性脑卒中指由脑血管血液循环障碍导致的局部脑组织损伤,缺血发生时神经细胞因能量耗竭、无氧酵解、兴奋性氨基酸大量释放而产生酸中毒,氧自由基损伤和细胞内钙超载也同时发生,最终将使神经细胞走向凋亡。凋亡是细胞的经典死亡途径之一,已有研究证明lncRNA-MIAT和miR-106b-5p在不同细胞中通过各异的机制参与细胞凋
【基金项目】
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项目名称:内皮细胞膜微粒通过lncRNAMIAT调控神经元Beclin-1和Caspase-3加重脑缺血再灌注损伤的机制,项目合同编号:81860222,项目来源:国家自然科学基金,项目起止时间:2018年9月-2022年12月
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研究背景脑卒中是全球第二大致死和第三大致残原因,缺血性脑卒中在脑卒中中占比80%。缺血性脑卒中指由脑血管血液循环障碍导致的局部脑组织损伤,缺血发生时神经细胞因能量耗竭、无氧酵解、兴奋性氨基酸大量释放而产生酸中毒,氧自由基损伤和细胞内钙超载也同时发生,最终将使神经细胞走向凋亡。凋亡是细胞的经典死亡途径之一,已有研究证明lncRNA-MIAT和miR-106b-5p在不同细胞中通过各异的机制参与细胞凋亡。当缺血性脑卒中发生时,患者外周血中可以检测到lncRNA-MIAT和miR-106b-5p的表达异常。由此猜测,lncRNA-MIAT和miR-106b-5p可能参与神经细胞的凋亡进程。研究方法（1）给予SH-SY5Y缺氧无糖的培养环境以模拟缺血性脑卒中发生时的神经细胞状态,使用RT-qPCR技术测定其内MIAT和miR-106b-5p的表达水平。（2）使用细胞转染技术特异性下调SH-SY5Y内MIAT的表达,通过western blot、流式细胞术、电镜检测和观察细胞的凋亡水平,使用CCK-8检测细胞活性。（3）使用细胞转染技术特异性上调SH-SY5Y内miR-106b-5p的表达,通过western blot、流式细胞术、电镜检测和观察细胞的凋亡水平,使用CCK-8检测细胞活性。（4）使用细胞转染技术特异性下调SH-SY5Y内miR-106b-5p的表达,通过western blot、流式细胞术、电镜检测和观察细胞的凋亡水平,使用CCK-8检测细胞活性。（5）使用细胞装染技术调控SH-SY5Y内MIAT和miR-106b-5p的表达水平,通过RT-qPCR技术检测其相互之间表达量的影响。（6）使用基因预测软件Targetscan 7.2预测MIAT和miR-106b-5p的靶基因,并通过双荧光素酶报告实验验证。结果（1）缺氧无糖条件使SH-SY5Y内MIAT表达上调、miR-106b-5p表达下降。（2）沉默SH-SY5Y内的MIAT可使CASP3表达下调,抑制细胞凋亡。（3）上调miR-106b-5p表达未观察到SH-SY5Y凋亡水平的变化。（4）抑制miR-106b-5p表达使SH-SY5Y内CASP3表达下调,促进细胞凋亡。（5）沉默MIAT使SH-SY5Y细胞活性提高,抑制miR-106b-5p使细胞活性下降,过表达miR-106b-5p对细胞活性无明显影响。（6）MIAT与miR-106b-5p之间的表达呈负反馈调节。（7）靶基因预测软件预测MIAT和CASP3为miR-106b-5p的靶基因,双荧光素酶实验证实MIAT可靶向结合miR-106b-5p,而CASP3可能不是miR-106b-5p的靶基因。结论（1）缺氧无糖条件下,SH-SY5Y细胞中MIAT表达上调、miR-106b-5p表达下降;SH-SY5Y细胞中调控MIAT与miR-106b-5p的表达可影响细胞的活性及凋亡。（2）MIAT与miR-106b-5p的表达水平可相互调节,MIAT和miR-106b-5p可靶向结合,miR-106b-5p对CASP3的作用机制有待进一步探究。
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