目的：　　氨基脲敏感型胺氧化酶（semicarbazide-sensitive amine oxidase, SSAO, EC1.4.3.6）是一类含铜和醌并对氨基脲敏感的胺氧化酶，其广泛分布于各种组织及血液中，SSAO具有氧化脱氨基作用，能够催化脂肪族和芳香族伯胺类化合物转化为相应的醛、过氧化氢（Hydrogen peroxide，H2O2）和氨（Ammonia，NH3）。近年来研究发现，SSAO可参与葡萄糖转运，抑制脂肪分解，参与氧化应激与粒细胞渗透，其催化产生的代谢醛类产物可引起蛋白交联，造成血管内皮细胞损伤，可能与动脉粥样硬化的发生发展有关。一些疾病如阿尔茨海默症、急性或慢性炎症及Ⅰ型Ⅱ型糖尿病患者的组织或血浆中SSAO活性均发生变化，这使SSAO成为相关疾病的潜在治疗靶点，但目前对SSAO的病理生理功能还未完全阐明。由于体外分离培养的细胞处于去分化状态，不表达或低表达SSAO，因此，为了在体外大量表达SSAO，本文在pcDNA3-SSAO和pcFLAG-SSAO表达载体基础上构建了pEGFP-N3-SSAO和pIRES2-EGFP-SSAO两种重组表达质粒，将以上四种重组质粒在293T细胞中进行瞬时转染，分析转染后外源重组表达的SSAO在细胞内的定位情况及其酶活性，从而筛选出体外表达活性较高的重组质粒，为后续对SSAO病理生理功能的研究提供基础。　　方法：　　⑴以pcDNA3-SSAO为模板设计获取SSAO编码区全序列的引物，利用PCR扩增技术获取SSAO编码区全序列，将上述PCR产物用BamH I和Sal I双酶切，载体质粒pIRES2-EGFP、pEGFP-N3分别用Bgl II和Sal I双酶切，利用T4连接酶将PCR产物分别连入相应表达载体中，构建SSAO与绿色荧光蛋白（GFP）的融合表达质粒pEGFP-N3-SSAO和共表达质粒pIRES2-EGFP-SSAO。⑵将所得重组质粒及原有质粒pcFLAG-SSAO瞬时转染293T细胞，细胞培养36 h后，将转染pcFLAG-SSAO的细胞经免疫荧光染色后，并分别将各组转染细胞进行DAPI染色，在荧光显微镜下观察绿色荧光和红色荧光的分布及表达情况。⑶将重组质粒pcDNA3-SSAO、pcFLAG-SSAO、pEGFP-N3-SSAO、pIRES2-EGFP-SSAO和相应空质粒载体瞬时转染293T细胞，培养36 h后，收集上述细胞和未转染的293T细胞，经超声破碎后，取细胞匀浆通过高效液相色谱法（HPLC），检测瞬时转染细胞中SSAO活性。　　结果：　　①测序结果证明两种重组真核表达质粒pEGFP-N3-SSAO、pIRES2-EGFP-SSAO构建正确。②在转染后的293T细胞中，转染pEGFP-N3及pIRES2-EGFP空载体的细胞内，绿色荧光均匀分布于细胞质中；转染pIRES2-EGFP-SSAO质粒的细胞内，绿色荧光同样分布于细胞质中；转染pEGFP-N3-SSAO质粒的细胞内，绿色荧光分布于细胞膜中，转染pcFLAG-SSAO质粒的细胞内，红色荧光分布于细胞膜。③SSAO活性检测结果显示为：四种空载质粒转染的293T细胞的SSAO活性极低，转染 pcFLAG-SSAO质粒的293T细胞 SSAO活性为111.5±7.1 nmoL/mg/h，转染pIRES2-EGFP-SSAO质粒的293T细胞 SSAO活性为117.2±9.5 nmoL/mg/h，转染pcDNA3-SSAO质粒的293T细胞 SSAO活性为215.7±21.4 nmoL/mg/h，转染pEGFP-N3-SSAO质粒的293T细胞检测到极低的SSAO活性为2.1±0.3 nmoL/mg/h。　　结论：　　成功构建了重组质粒pEGFP-N3-SSAO和 pIRES2-EGFP-SSAO。证明了体外重组表达的SSAO分布于细胞膜上，与体内SSAO定位一致。活性测定结果表明在所有重组质粒中，以pcDNA3为载体外源表达的天然状态SSAO获得较高的胺氧化酶活性。