鞘糖脂是一类双亲性分子，由神经酰胺与寡糖链以糖苷键连接而成，在细胞信号传导、细胞生长、分化、凋亡等过程均发挥重要的作用；对多种神经退行性疾病（阿兹海默症、帕金森症、亨廷顿舞蹈症）及癌症、中风等均有积极的疗效。鞘糖脂N-去酰基化酶（SCDase）催化鞘糖脂中脂肪酸与鞘氨醇间的酰胺键断裂，产生相应的去酰基化形式，并可催化水解的可逆反应，在鞘糖脂类化合物修饰及体外酶法合成中具有重要应用价值。目前仅有来源于Pseudomonas sp. TK4和Shewanella alga G8两个SCDase已报道，其中后者（SCDase-G8）的全长基因已克隆表达，全长基因产物经C末端切除加工后成为成熟蛋白，然而对于成熟蛋白的异源表达和性质表征还未有详细报道。我们克隆了SCDase-G8全长基因的C末端截短突变体（SCDase-G8_del），并成功在大肠杆菌中实现功能表达，纯化获得了纯度在95%以上的SCDase。针对传统放射性同位素标记TLC分析SCDase活性方法的安全性低、耗时长、重复性差、分辨率不高、定量不准确等问题，建立了基于邻苯二甲醛柱前衍生的HPLC酶活性测定方法，该方法安全快捷、灵敏度好、准确性高，并适宜于大规模高通量分析。我们对重组酶进行性质表征发现，其比活力为125.2U/mg；最适作用温度为40℃，最适pH为8.0；5mM Zn²⁺、Cu²⁺强烈抑制酶活性，而相同浓度其他二价金属离子表现出不同程度的激活作用，其中Mn²⁺、Co²⁺最为强烈，可提高约40%酶活性；Triton X-100可显著增强酶活性，在0.3%Triton X-100存在时，其活性可提升约14倍; DMSO、DME、DMF、THF等有机溶剂在较低浓度时抑制SCDase的活性，但浓度提高时抑制作用减弱，其中DME在20%浓度时可以使酶活性提高约30%。我们首次应用SCDase-G8_del合成了神经节苷脂GM1及其前体核心Glc-Cer，并成功地与由来源于Rhodococcus sp. strain M-777的内切糖基神经酰胺酶（EGCII）改造而来的糖苷合成酶（Glycosynthase）连用，建立了针对GM1的一锅酶法合成体系，产物产率为41.5%，获得了结构单一的GM1（d18:1/18:0）。本研究建立了快速、灵敏、准确的SCDase活性分析方法，为SCDase的系统研究提供了有力的工具；克隆表达并系统表征了来源于Shewanella alga G8的SCDase成熟蛋白，初步探索了其在神经节苷脂酶法合成中的应用，为鞘糖脂类化合物的体外酶法合成奠定了基础。