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油茶(Camellia oleifera)是山茶科(Theaceae)山茶属(Camellia)植物中油脂含量较高的植物的总称,是原产我国的重要木本油料树种。油茶籽油是国际粮农组织推荐的一种营养、健康的纯天然高级植物食用油,油茶与油橄榄、油棕和椰子并称为世界四大木本食用油料植物。油茶是我国得天独厚的植物资源,是我国木本粮油产业发展不可替代的战略性资源,也是海南省重要的乡土油料树种。适应当地气候和土壤条件的良种少、良种壮苗匮乏是当前制约海南油茶良种推广种植和油茶产业进一步发展的两大瓶颈。挖掘、保存和利用热带油茶优良种质资源;选育含油率高、品质优良、适应性强的海南油茶优质高产新品种以及加快新品种良种繁育和推广,是加快海南油茶产业发展和维持海南油茶产业可持续健康发展的有效策略。海南地区的主栽品种为白花越南油茶(Camellia vietnamensis T.C.Huang ex Hu),本研究分别以海南本地白花油茶良种的未成熟胚、花药为外植体,主要通过分生结节和体细胞胚状体途径建立了白花油茶的再生体系;以顶芽和含腋芽茎段为外植体,主要通过器官直接发生途径,建立了海南白花油茶离体快速繁殖体系,为海南白花油茶今后的种质资源离体保存、良种壮苗繁育、缩短杂交育种世代周期以及利用基因工程进行油茶功能基因研究和定向分子育种等奠定技术基础。主要研究结果如下:1. 以油茶未成熟胚为外植体时,盛花期后240-300 d的油茶幼胚为最适宜外植体,接种在改良MS+Kt 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+Zt 5.0 mg/L培养基上,初代诱导率90%以上,以分生结节组织为主;改良MS+Kt(1.0~2.0)mg/L+NAA0.2mg/L培养基适合分生结节组织的增殖,增殖系数约为4.6;未成熟胚分生结节组织在1/2改良MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA0.2 mg/L+IAA 0.2 mg/L+Zt 5.0 mg/L+CH400 mg/L培养基上以分化不定芽为主,平均每块分生结节组织块诱导不定芽11.3个,不定芽以无糖暴露培养生根方式为宜,再生植株移栽成活率91.6%;分生结节在1/2改良MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+Zt 5.0 mg/L+CH 400 mg/L上分化体胚为主,每块分生结节分化6.5个体胚,具双子叶的体细胞胚状体在改良MS+6-BA 0.2 mg/L+IAA 2.0 mg/L+GA30.5 mg/L+CH 200 mg/L培养基上有效成熟和萌发,萌发率72.1%,胚芽和胚根有效伸长形成体胚再生植株,再生植株移栽成活率94.7%。2. 以油茶花药为外植体时,以花粉发育处于单核靠边期的花药为诱导花药胚性愈伤组织的合适外植体,花蕾横纵比在0.53左右;适宜海南油茶花药胚性愈伤组织诱导的初代培养基为改良MS+2,4-D 2.0 mg/L+Zt 2.0 mg/L;胚性愈伤组织在增殖与再分化培养基1/2改良MS+6-BA 2.0 mg/L+Zt 1.0 mg/L+NAA 0.5mg/L中以暗培养的方式培养可有效增殖,并分化出体细胞胚;体细胞胚在1/2改良MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1 mg/L培养基上可诱导体胚成熟和体胚萌发形成再生植株,但诱导率较低,培养基配比仍有待进一步的优化。3. 以油茶腋芽和顶芽为外植体时,最适消毒方法为2%次氯酸钠溶液15min和0.1%Hg Cl2溶液12min的复合消毒方式,污染率可降至9.7%;将外植体以保留1/3叶片的接种方式接种在初代诱导培养基改良MS+GA30.5 mg/L+Zt 1.0mg/L中,顶芽的成芽率、成梢率和多芽率分别为68.9%、40.3%和41.9%,腋芽的成芽率、成梢率和多芽率分别为82.2%、40.6%和38.7%;最佳增殖培养基为改良MS+Zt 2.0 mg/L+IAA 0.3 mg/L,顶芽和腋芽的增殖系数分别达到了5.6和6.8;油茶组培增殖芽壮芽的最佳培养基为改良MS+IAA 0.5 mg/L+GA30.5mg/L+CH 200 mg/L,定芽茎粗有效增粗85%、芽长有效增高了79%。4. 以组培芽作为芽苗砧嫁接接穗,嫁接前组培芽基部在6-BA中浸泡2~3min可显著提高嫁接成活率。以常规半木质化枝条一叶一芽接穗做为对照,组培苗无菌单芽作为接穗进行芽苗砧嫁接,前期生长相对缓慢,但在后期表现出优势,嫁接92 d、252 d,组培芽嫁接苗新梢长度和新增叶片与对照无显著差异,但新梢茎粗比半硬枝一叶一芽嫁接苗的分别显著增加了171%和41.8%。