抗罗红霉素适配体的筛选和表征

来源 :华侨大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cuileidan
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
罗红霉素属于大环内酯抗生素,在治疗革兰氏阳性球菌、革兰氏阴性球菌、革兰氏阳性菌和某些革兰氏阴性菌等方面发挥着重要的作用。近年来,罗红霉素在医疗、畜牧业和水产养殖业等行业大量甚至滥用,由此带来的环境污染问题以及细菌耐药性问题成为关注热点。因此,建立简单、、快速、高效且价格低廉的罗红霉素残留方法对环境中罗红霉素的检测很有必要。本实验基于Capture-SELEX技术,从总长为80个碱基序列,中间包括40个随机碱基的ssDNA初始文库中筛选具有高亲和性和高特异性的罗红霉素核酸适配体。经过16轮的筛选,文库富集情况达到最佳。制备克隆感受态,并将最后一轮筛选的ssDNA进行PCR扩增后,进行连接和转化。挑选阳性菌液进行测序,获得了21条能与罗红霉素特异性结合的ssDNA适配体序列。利用DANMAN软件进行一级结构同源性比较和进化树分析,将其分为3个家族并具有高达73%的相似性。使用Mfold软件对这些适配体进行二级结构模拟,发现这些适配体的二级结构具有高度的相似性。挑选候选适配体NO.01,利用SGI法进行亲和性和特异性验证,测得解离常数为(0.4621±0.07545)μM,罗红霉素溶液浓度X在0.0186μM0.3725μM与荧光强度比值Y呈现良好的线性关系,线性关系曲线为Y=2.851*X+0.01503,相关系数R2=0.9904。在与大环内酯类中的其他抗生素,即红霉素、克拉霉素和阿奇霉素均具有差异性。利用筛选得到的罗红霉素适配体,建立基于纳米金比色可视法对罗红霉素进行检测。首先优化检测条件,即优化氯化钠浓度和适配体浓度,其最佳浓度分别为120 mM和0.12μM。再利用优化后的条件对罗红霉素进行灵敏度分析,当罗红霉素浓度在0.1μM1.2μM呈现良好的线性关系,线性关系曲线为:?A=0.3130*Croxithromycin+0.01828,相关系数R2为0.9902,最低检测限为0.077μM。再利用该方法对罗红霉素进行了特异性分析,该方法中适配体对罗红霉素和阿奇霉素均具有较强的亲和力,可能与分子构型有关。最后利用该比色可视法对实际水样,即实验室自来水水样和学校秋中湖水样进行了罗红霉素加标回收测定,回收率(得到的结果与理论值的比值)在90.48%109.39%,相对标准偏差在1.07%5.07%,说明该方法具有可行性。
其他文献
在传统的时域有限差分算法(Finite-Difference Time-Domain,FDTD)中,存在着稳定性限制条件,即(Courant-Friedrichs-Lewy,CFL)稳定性条件,计算时间步△t和空间离散间隔被CFL条
当前网络与通信技术发展迅猛,文字和多媒体等内容服务逐渐成为网络的主体,用户在请求信息时更加关注内容本身而不关心内容的位置,TCP/IP架构已无法适应网络的发展需求。以信
在世界海运中干散货的运量占了三分之一左右,航次租船运输是干散货运输的主要方式之一,因干散货航次租船经营时不具备固定的港口、航线和船期表,以及航运市场和港口船舶燃油
摩尔定律已经推动了半导体行业的显著进步。得益于较好的静电控制,鳍式场效应晶体管(Fin Field-Effect Transistor,FinFET)架构,作为主流器件技术被持续微缩至较小的特征尺寸。然而进一步缩小由于寄生成分等限制面临着诸多问题。本文主要通过计算机辅助设计(Technology Computer Aided Design,TCAD)仿真,将FinFET关键性尺寸微缩至极限值,考虑
高速铁路是促进我国国民经济迅速发展、加快资源快速流通、缩短时空距离的重要工具之一。但是随着高速列车运行速度地不断提升,列车与接触网、轮轨、空气的相互作用力显著增
GFRP材料作为一种新型材料,具有质轻高强、耐腐蚀性能好等优点,其应用和研究已成为国内外土木工程界的热点。碱作用下GFRP管混凝土短柱力学性能退化规律关系到结构的安全性能
二十世纪六七十年代,作为法兰克福学派的激进代表和当时新左派运动与学生与运动的精神领袖,马尔库塞一度成为西方思想界一位极富争议的思想家。法兰克福学派在政治,经济和文化领域对当代资本主义社会的批判在很大程度上通过马尔库塞的理论和实践广为人知。在整个马尔库塞的一生中,他毫不犹豫地站在权威和对立的立场上。他的思想发展丰富而复杂。但无论是思考哲学,批判社会,还是追求美学,“否定性”贯穿马尔库塞的一生,马尔库
随着全球城市化进程的推进,智能监控逐渐成为了计算机视觉领域的研究热点,人群计数问题作为智能监控的核心问题之一,在人群限流引流等应用场景中具有重大意义。目前人群计数
碳纤维增强复合材料(Carbon Fiber Reinforced Polymer,简称CFRP)因质量轻、强度高、耐疲劳和抗腐蚀性能优越等特点,已广泛应用于混凝土结构加固领域中。CFRP加固技术按照材
润滑油作为机械设备的“血液”,具有冷却、清洁和减少机械零件磨损的作用。但在实际工作中,润滑油不可避免地会被各种污染物影响,从而影响设备正常运行。在润滑油各种污染物