DSF是一种治疗酒精依赖症的药物,DEDTC是DSF的主要活性代谢产物,DEDTC(或DSF)具有抑癌作用,当DEDTC与铜按照2:1的比例结合形成CuET以后的抑癌效果更显著。但是DEDTC和铜在水中互不相溶,容易生成沉淀,因为存在溶解性问题,所以动物实验只能采用分开给药的方式。这种分开给药的方式就会造成DEDTC与铜在动物体内的比例不固定,两者盲目结合,所以无法判断体内形成多少CuET,这就阻碍了我们认识CuET的安全性与疗效。尽管CuET潜力巨大但却无法进入临床前药理与毒理评价。因此,CuET的溶解性问题丞待解决,而运用纳米技术将CuET制备成纳米颗粒是解决其溶解性问题的有效方式之一。茶多糖是茶叶中的糖类或与蛋白质相结合形成的一类酸性多糖或酸性糖蛋白。茶多糖因为其毒性极低,并具有降血糖、抗氧化、调节免疫等多种生物功效,所以被认为是一种健康的材料。近年来开始出现茶多糖用于纳米制备的研究,这就提示我们可以利用茶多糖制备出纳米CuET,从而解决其不溶性问题。另一方面,牛血清白蛋白(BSA),因其具有易溶于水,无毒性,无免疫排斥反应,具有良好的生物相容性,优先集聚在肿瘤组织中,能够生物降解,成本低等优点而得到众多研究者的青睐,目前已经有大量研究成果就是利用BSA制备出纳米材料,BSA因此也被认为是理想的纳米分散剂。基于上述原由,我们首次利用茶多糖或BSA作为纳米分散剂制备出纳米CuET,并对该纳米材料进行表征和稳定性分析以及对其安全性和药理药效做出评价。此外,我们还利用制备的纳米CuET,初步研究了其与茶氨酸联合使用后的抑癌效果。本研究主要取得的研究结果如下:(1)利用茶多糖或BSA制备出纳米CuET,两种纳米颗粒的尺寸分别约为81 nm和20 nm。接下来,我们对制备的两种纳米材料的稳定性进行了研究,结果表明,相较于放在室温环境下,温度在4℃时,纳米CuET的尺寸、Zeta电位和PDI指标都显示在低温环境下更加稳定。在研究制备的纳米CuET的抑癌效果时,我们主要从细胞层面上通过细胞毒实验、克隆实验和划痕实验对两种纳米材料的抑癌效果进行了评价,结果显示两种材料对TCA8113细胞的抑制效果显著,且两种材料的给药剂量相当。最后,我们利用TCA8113细胞研究了两种材料对细胞内的GSH含量的影响,结果表明,给药处理7 h后细胞后的GSH含量明显下降。(2)接下来我们利用BSA制备的纳米CuET研究了其抑癌相关的蛋白表达情况,在动物上的给药最大耐受剂量以及对利用H22细胞建立的癌症模型的抑制效果研究。结果发现,在细胞实验上,纳米CuET主要能够调动凋亡相关蛋白γ-H2AX、Cl-caspase 3、Cl-PARP、p21等的表达,抑制了NFκB/P65和PI3K的表达,此外,纳米CuET处理后促进了蛋白泛素化表达。在动物实验上,我们首先研究了纳米CuET的给药安全剂量和最大耐受剂量,在单针腹腔给药0.4和0.6 mg Cu/kg体重剂量7天后,0.6 mg Cu/kg剂量的小鼠出现毒副反应;连续7天腹腔给药0.3和0.4 mg Cu/kg体重剂量后发现0.4 mg Cu/kg剂量致使小鼠出现毒性反应。利用研究出的给药剂量,我们接下来研究了纳米CuET在无毒剂量下对小鼠H22肝腹水模型的抑制情况,结果表明纳米CuET对该模型具有显著的抑制效果。同样地,给药后的小鼠H22细胞内的GSH含量明显下降,并且也能够调动凋亡相关蛋白并抑制促生长的相关蛋白的表达以及使蛋白泛素化表达。(3)最后,我们利用Hep G2细胞通过细胞毒实验和克隆实验初步研究了茶氨酸对BSA制备的纳米CuET抑癌效果的影响,结果显示,在细胞毒实验上茶氨酸本身产生的细胞毒低,但是能够加强纳米CuET对细胞增殖的杀伤效果,同时,在克隆实验上结果显示5 m M的茶氨酸不抑制细胞集落的生成,但是能够促进纳米CuET对细胞集落生成的抑制效果。这样的结果初步表明,茶氨酸能够加强纳米CuET的抑癌效果。