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背景及目的: 胃癌是我国常见的恶性消化道肿瘤之一,恶性程度高及术后复发率高. 所以寻找可预测胃癌术后复发和转移的高敏感度和特异性的生物标志物是改变目前这种状况的有效手段之一.而胃癌的发生进展与相关miRNA的异常表达紧密相关.miRNA在肿瘤的发生、进展、转移、复发、耐药等病理进展中起着癌基因或抑癌基因的作用,并且在组织细胞中的表达显示出显著的组织特异性、肿瘤相关性和表达稳定性.外周血中miRNA也显示有这些特性,并且更具简便性,这使其有望成为一种理想的肿瘤标志物之一. 目前围绕胃癌术后复发转移相关的miRNA研究仍处于初步摸索阶段,本文旨在探讨miRNA在胃癌中的表达和临床意义,尤其应用Luminex技术筛选、建立由特定miRNA分子组成的胃癌手术后复发诊断指纹图谱,为胃癌患者术后提供新一代检测术后复发转移的肿瘤标志物. 方法: 1.收集胃癌手术术后局部复发和未复发胃癌患者各50例的癌组织、配对癌旁正常组织标本、术前血清标本以及性别、年龄匹配的健康对照血清50例.首先应用RT-PCR技术检测特异性miRNAs的表达并分析其与患者临床病理特征关系. 2.收集各100例的胃癌术后复发和未复发术前血滴样本,100例性别、年龄匹配的健康者血清及另外50例胃癌患者术前1天、术后七天和各随访时间点的血清样本,运用Luminex技术检测上述血清中miRNA的表达情况.分析、筛选出在肿瘤患者血清中显著升高、术后显著降低且在胃癌术后局部复发后又升高的差异显著,重复性和特异性好的miRNA,并进行优化组合. 3.收集100例胃癌术前、术后血清样本,健康对照血清100例,将miRNA分子组合用于这些样本的诊断,利用BRB array tools软件分析计算其在胃癌术后复发诊断中的准确率、灵敏度和特异性.同时收集结直肠癌、肝癌患者各50例术前、术后血清样本分析上述分子组合的表达情况,以检测在直肠癌和肝癌中表达的特异性.并结合临床资料,分析这些特定miRNA分子的表达与临床病理特征及预后之间的关系. 结果: 1.在42种miRNA中筛选到miR-10b、miR-21、miR-183、miR-371-5p、miR-378在肿瘤组织和血清中的表达一致上调,并具有良好相关性(r分别为0.995、0.998、0.966、0.985、0.981,均P=0.000).肿瘤组织中5种miRNAs的表达水平均与肿瘤浸润深度、淋巴结分期、远处转移及临床分期显著相关(均P=0.000). 2.miR-10b、miR-21、miR-183、miR-371-5p、miR-378 5种miRNAs在胃癌患者术前血清中的表达显著高于健康对照组,其在胃癌组和健康组表达的中位数分别为:miR-10b(8.25比3.25)、miR-21(11.18比3.25)、miR-183(22.86比4.13)、miR-371-5p(13.57比3.37)、miR-378(18.19比3.99),均P=0.000.术后血清miR-10b在早期胃癌复发组与未复发组相比上调不明显(7.41比7.33,P=0.336).50例动态观察的患者中,复发组术后血清miR-21、miRNA183、miR-371-5-p、miR-378均显著下调,复发后,血清中的miR-21、miR-371-5p、miR-378显著上调,但miR-183上调不显著(复发组比未复发组中位数分别为1.99和1.14),提示miR-183可以从组合中剔除. 3.术前血清miR-21在胃癌、肝癌和结直肠癌复发组中表达的中位数分别为5.55、6.39、5.46,明显高于为复发组(中位数分别为2.52、2.87、2.18),均P=0.000;术前血清miR-371-5p在胃癌、肝癌复发组中表达的中位数分别为7.29、2.11,明显高于未复发组(3.23),P=0.000;术前血清miR-378在胃癌和结直肠癌复发组表达的中位数分别为10.13、0.33,与未复发组中表达的中位数(分别为3.23、0.45)差异有统计学意义(均P=0.000);复发组和未复发组肝癌患者血清中miR-378表达中位数分别为0.98、1.09,两者差异无统计学意义(P=0.410).3种miRNAs与3种消化道肿瘤M分析相关.miR-21表达随3种肿瘤切除、复发而成动态变化,miR-371-5p、miR-378仅与胃癌呈动态分布. 结论: 特异性miRNAs指纹图谱可以预测胃癌术后复发;筛选出3种miRNAs(miR21、miR-371-5p、miR-378)分子组合作为胃癌复发外周血miRNAs指纹图谱,可以早期预测胃癌复发;miR-21有助于评估消化道肿瘤非特异性预后,检查miR-371-5p和miR-378有助于评估胃癌和结直肠癌患者的预后.