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背景和目的尖锐湿疣(condyloma acuminatum,CA)是临床中常见的性传播疾病(sexually transmitted disease,STD)之一,由人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染引起,其中最为常见的是HPV6和HPV11型。CA好发于性活跃人群,主要表现为外生殖器及肛周的增生性病变,本病传染性强、增殖快、有发生恶变的可能,对患者的身心健康造成极大影响。CA传统的治疗方法如局部外用药物、激光、冷冻、手术等,虽然在一定程度上可以去除病变的疣体组织,但治疗后的高复发率和多种不良反应是医师和患者常面临的临床问题。艾拉-光动力疗法(5-aminolevulinic acid photodynamic therapy,ALA-PDT)是 CA 临床治疗的一种新方法,在提高CA治疗效果、减少对组织的创伤、降低复发率等方面显现出了独特的优势,目前已被广泛应用于CA的临床治疗。ALA-PDT治疗CA的机制较为复杂,可能涉及其对CA组织的增殖、凋亡、血管生成、免疫等众多复杂因素产生影响,而目前关于ALA-PDT对CA免疫机制的研究较少。Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)是免疫细胞识别病原微生物保守结构的受体,能启动一系列信号通路,激活机体的免疫应答抵抗病原体入侵。TLR4是人类中发现最早的TLR,参与免疫调节和炎症反应等过程。核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)是一种高效的转录调节因子,被激活后调控多种基因的表达,参与炎症反应、免疫调节、细胞增殖等过程。本实验通过观察ALA-PDT治疗前后CA组织中TLR4和NF-κB表达的变化,探讨ALA-PDT治疗CA可能的相关免疫机制,以丰富ALA-PDT治疗CA的免疫理论机制。材料与方法1 材料本实验纳入52例CA患者,均系郑州大学第一附属医院皮肤科患者,就诊时间为2018年6月～2019年6月。其中女22例,男30例,年龄20～55岁,平均34.4±6.5岁;病程20～120天,平均60.3±15.6天。所有患者均具有CA典型的临床表现,皮损醋酸白试验阳性,病理活检见挖空细胞,皮损处取材原位杂交法均检测到HPV感染。剔除标准:1)本次就诊前经治疗者;2)合并其他系统性疾病或近期应用免疫调节剂者;3)妊娠期或哺乳期患者;4)未成年者。2 方法ALA-PDT治疗前和治疗后1周分别切取少量疣体作为对照组和实验组。采用免疫组化SP法检测治疗前后CA组织中TLR4和NF-κB的表达情况。TLR4定位于胞膜和胞浆,NF-κB主要定位于胞核,少量位于胞浆。阳性细胞的判定:镜下观察到棕黄、黄色或淡黄色颗粒。根据阳性细胞百分比及着色强度进行分级评分。阳性细胞百分比≥76%、51%～75%、26%～50%、11%～25%、≤10%分别记4、3、2、1、0分;着色强度为棕黄、黄色、淡黄、未着色分别记3、2、1、0分,每张切片在高倍(×400)光学显微镜下随机观察5个不同区域,取平均值作为该项得分。将以上两项得分的积作为总分,总分为9～12分、5～8分、1～4分、0分分别代表强阳性(+++)、阳性(++)、弱阳性(+)、阴性(-)。3 统计学分析使用SPSS23.0软件对数据进行分析。ALA-PDT治疗前后CA组织中TLR4和NF-κB的表达率差异用χ2检验,表达强度差异用秩和检验;用Spearman方法分析治疗后CA组织中二者的相关性。当P<0.05时,表示差异具有统计学意义。结果1、ALA-PDT治疗前后CA组织中TLR4的表达ALA-PDT治疗前,52例CA患者中TLR4阳性表达45例,阳性表达率为86.53%(45/52),表达强度多为++～+++;治疗后TLR4阳性表达23例,阳性表达率为44.23%(23/52),表达强度多为-～+;ALA-PDT治疗后TLR4的阳性表达率(χ2=20.562,P<0.05)和阳性表达强度(H=-6.295,P<0.05)均低于治疗前,且差异均有统计学意义。2、ALA-PDT治疗前后CA组织中NF-κB的表达ALA-PDT治疗前,52例CA患者中NF-κB阳性表达49例,阳性表达率为94.23%(49/52),表达强度多为++～+++;治疗后NF-κB阳性表达20例,阳性表达率为38.46%(20/52),表达强度多为-～+;ALA-PDT治疗后NF-κB的阳性表达率(χ2=36.217,P<0.05)和阳性表达强度(H=-7.280,P<0.05)均低于治疗前,且差异均有统计学意义。3、ALA-PDT治疗后TLR4和NF-κB在CA组织中表达的相关性ALA-PDT治疗后,TLR4在23例患者中呈阳性表达,在29例患者呈阴性表达;NF-κB在20例患者中呈阳性表达,在32例患者中呈阴性表达。治疗后CA组织中-TLR4和NF-κB的表达呈正相关(r=0.486,P<0.05)。结论1、ALA-PDT治疗后CA组织中TLR4的阳性表达率和表达强度均明显降低,提示ALA-PDT可能通过降低CA组织中TLR4的表达,减少CA组织局部免疫抑制因子的释放,从而改善局部免疫状态,促进CA消退。2、ALA-PDT治疗后CA组织中NF-κB的阳性表达率和表达强度均明显降低,提示ALA-PDT可能通过降低NF-κB的表达,调节下游细胞因子的产生进而改善CA局部的免疫抑制状态,抑制CA的增生,促进CA组织的消退。3、ALA-PDT治疗后CA组织中TLR4和NF-κB的表达呈正相关,提示二者可能通过TLR4/NF-κB信号转导通路来减少炎症细胞因子释放、改善局部免疫抑制状态对CA的消退起协同促进作用。