丽格海棠遗传转化及离体诱变体系的研究

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丽格海棠(Rieger Begonia),又称玫瑰海棠,属秋海棠科秋海棠属的多年生草本花卉。因其花色艳美、花型多样、花朵硕大、花期特长,尤其是在春节开花,深受市场的欢迎。目前,最好的丽格海棠盆花仍以进口为主,但由于丽格海棠不耐运输,长时间运输不仅使丽格海棠折断受损情况普遍发生,而且对叶片的形状、花的形态也会造成很大的影响,导致观赏效果的严重下降;同时,丽格海棠存在生长周期长,抗病性差和栽培难度大等缺点,因此,在国内对丽格海棠进行品种的遗传改良,加强其繁殖和栽培技术的研究已迫在眉睫。本研究以丽格海棠叶片和叶柄为外植体,通过对不同激素浓度的筛选,构建了丽格海棠的受体再生系统,在此基础上,初步建立了丽格海棠的遗传转化体系和EMS离体诱变体系,为丽格海棠品种改良奠定坚实基础。研究结果如下:1、优化了丽格海棠的高效再生体系,为后期的遗传转化、离体诱变奠定了坚实的基础。它们分别是:MS+6-BA0.5 mg/L+NAA0.05mg/L+KT0.1mg/+蔗糖3%+琼脂0.7%pH6.0(最适生芽培养基),其生芽率为95%,且平均有效芽数高达17.87;1/2MS+IBA0.2mg/L+NAA0.15mg/L+蔗糖3%+琼脂0.7%pH6.0(最适生根培养基),生根率为100%,且小苗生长壮实。2、研究了丽格海棠外植体对抗生素的敏感性。试验结果表明:Km=100mg/L能完全抑制丽格海棠叶片外植体的再生,而半抑制剂量则为Km=25~50 mg/L;当Cef>250 mg/L时,其对丽格海棠叶片外植体的再生有一定的影响。3、初步构建了丽格海棠的遗传转化体系。利用根癌农杆菌EHA52将目的基因cycd2转入丽格海棠受体中,T0代愈伤组织的PCR和Southern杂交分析证明cycd2基因已整合到丽格海棠基因组中。4、建立了丽格海棠EMS离体诱变技术体系。本试验研究了EMS的处理时间、处理浓度和处理温度对丽格海棠叶片外植体离体再生的影响,结果表明:EMS=0.4%(8h,20℃)为丽格海棠叶片外植体再生的半抑制剂量,该浓度适合诱变处理。5、获得了不同类型的变异植株。通过EMS对丽格海棠进行离体诱变,在M0代中筛选出21株在形态上表现出变异的植株,通过对这些变异植株的RAPD分析,有12株的电泳条带表现出多态性,进一步证明这些变异是发生在分子水平上的。6、探讨了变异的遗传稳定性及嵌合变异体的分离,对12个在基因组上表现出变异的植株进行离体培养,在M2代分离出嵌合体变异,并鉴定出有7个变异是可以遗传的,有4个变异不能遗传,还有一个在继续观察之中。
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