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目的胃癌是人类消化系统中常见的恶性肿瘤,其发病率在我国恶性肿瘤中位居第二位,死亡率位居第三位,严重威胁人类健康[1]。绝大部分患者在确诊胃癌时已处于中晚期,胃癌的诊断治疗及预后目前仍不乐观,关于胃癌的基础与临床研究显得非常重要。端粒是位于真核生物染色体末端的DNA-蛋白结构,由大量的端粒结合蛋白和许多TTAGGG重复序列组成。端粒结合蛋白TRF1(telomeric-repeat binding factor-1)、TRF2(telomeric-repeat binding factor-2)、POT1(protection of telomeres 1)、TPP1(adrenocortical dysplasia protein homolog isoform1)、TIN2(TRF1-interacting nuclear protein 2)和Rap1(repressor activator protein 1)六个蛋白组成Shelterin复合体[2]。已经证明端粒防止染色体末端发生融合、降解、丢失和重排等[3],在细胞发生分裂时,端粒长度会逐渐缩短,当端粒长度缩短到一定程度时,染色体无法继续进行半保留复制,细胞开始出现衰老死亡[4]。端粒结合蛋白参与维持端粒结构和功能的稳定,与细胞衰老和癌变密切相关[5]。最近研究发现端粒结合蛋白除了在端粒发挥作用外,也具有端粒外功能[6-11]。Rap1与TRF2在端粒组成复合体,敲除TRF2会导致细胞核Rap1明显减少,人类细胞的细胞质中也存在一定数量Rap1,这部分Rap1不与TRF2结合且不受TRF2表达水平的影响[12]。细胞质Rap1通过结合端粒外TTAGGG位点调控基因的转录[6]。另外Teo等发现细胞质Rap1蛋白与IκB激酶(IκB kinases,IKKs)相互作用,磷酸化NF-κB的p65亚基,激活NF-κB信号通路。在乳腺癌组织中细胞质Rap1表达增加,抑制Rap1会促进乳腺癌细胞凋亡[8],但细胞质Rap1在胃癌发生发展中的作用仍不清楚。本研究采用免疫组化技术检测细胞质Rap1、细胞核NF-κB p65在胃癌组织、癌旁组织以及正常胃粘膜组织中的表达及相关性,探讨其在胃癌的发生发展中可能的作用及临床意义。材料与方法选取2013年4月至2015年7月在郑州大学第一附属医院经手术切除胃癌、癌旁(距离肿瘤组织边缘小于3 cm以内)及正常胃粘膜组织(距离肿瘤组织边缘大于3cm)各90例,且术前均未接受放、化疗及免疫治疗。其中男47例,女43例;年龄32~80岁,>50岁的48例,≤50岁的42例,中位年龄50.3岁。TNM分期:TNMⅠ~Ⅱ期35例,Ⅲ~Ⅳ期55例;病理分型均为腺癌:高分化腺癌30例,中分化腺癌28例,低分化腺癌32例;淋巴结转移:不伴淋巴结转移者38例,伴淋巴结转移者52例。浸润深度:未超过浆膜层者28例,超过浆膜层者62例。全部患者均知情同意且所有标本均通过了郑州大学第一附属医院伦理委员会的批准。使用40 g/L甲醛固定所需标本,将固定好的标本包埋在石蜡中,然后经过切片机切成厚约4μm切片,脱蜡水化,最后高温高压修复,采用免疫组织化学染色法SP,严格按照试剂盒说明书的具体步骤进行操作。以已知的阳性胃癌组织标本切片作为阳性对照,以PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。采用SPSS17.0统计软件包进行统计学分析,采用χ2检验进行组间差异比较,采用Spearman检验进行相关分析,P<0.05认为差异具有统计学意义。结果(1)Rap1蛋白为细胞质与细胞核着色,以细胞质着色判断为阳性,阳性染色呈深棕色。Rap1蛋白在正常胃粘膜组织主要为细胞核染色,细胞质染色较弱,细胞质Rap1在胃癌组织中表达增加。细胞质Rap1蛋白在正常胃组织、癌旁组织及胃腺癌组织中的阳性表达率逐渐升高,分别是22.2%、37.8%、75.6%,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)NF-κBp65蛋白为细胞质与细胞核着色,以细胞核着色判断为阳性,阳性染色呈深棕色。细胞核NF-κBp65蛋白在正常胃粘膜组织、癌旁组织及胃腺癌组织中的阳性表达率也是逐渐升高,分别是24.5%、46.7%、70.0%,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)Rap1蛋白在胃腺癌组织中的表达与癌组织的分化程度、淋巴结转移、浸润深度及TNM分期相关(P<0.05),与患者性别、年龄无关(P>0.05)。NF-κBp65蛋白在胃腺癌组织中的表达与癌组织的分化程度、淋巴结转移、浸润深度及TNM分期相关(P<0.05),与患者性别、年龄无关(P>0.05)。(4)细胞质Rap1蛋白与细胞核NF-κBp65蛋白在胃腺癌中表达呈正相关(r=0.241,P<0.05)。结论(1)细胞质Rap1蛋白在胃癌组织中的表达高于其在癌旁组织、正常胃粘膜组织中的表达。Rap1蛋白在胃腺癌组织中的表达与癌组织的分化程度、淋巴结转移、浸润深度及TNM分期相关。提示细胞质Rap1蛋白可能参与胃癌的发生发展。(2)细胞核NF-κBp65蛋白在胃癌组织中的表达高于其在癌旁组织、正常胃粘膜组织中的表达。NF-κBp65蛋白在胃腺癌组织中的表达与癌组织的分化程度、淋巴结转移、浸润深度及TNM分期相关。提示NF-κBp65蛋白可能参与胃癌的发生发展。(3)细胞质Rap1与细胞核NF-κB p65在胃癌中的表达呈明显正相关,提示Rap1细胞质表达可能与NF-κB所介导的信号转导通路相关,共同参与胃癌的发生发展。