我国部分地区禽大肠杆菌病流行病学、免疫保护机理和与低致病禽流感病毒的致病协同

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禽大肠杆菌病是家禽最常见的细菌病之一,给养禽业造成了严重的经济损失。我国有关该病的流行病学资料零散、缺乏代表性;在该病的免疫保护机理方面,外胰蛋白型、外膜蛋白本身与免疫保护间的关系未见报道,有关该病免疫保护性抗原的研究国内外报道较少;在该病的致病机理方面,临诊上低致病性禽流感常与禽大肠杆菌病并、继发,但用实验证实两者间存在致病协同作用却未见报道。本文就我国部分地区禽大肠杆菌病的流行病学、免疫保护机理、与低致病性禽流感病毒的协同致病作用以及禽源大肠杆菌1型菌毛抗原多样性的分子基础等方面展开的研究,从而为该病的有效控制提供参考。一、我国部分地区禽大肠杆菌病的流行病学 从江苏、广东、河南、新疆、四川、北京、黑龙江等18个省、市、自治区临诊上有典型大肠杆菌病病变的病禽1051羽采集病料,分离培养和鉴定出595株大肠杆菌。经O血清型测定,除144株未能定型、11株自凝外,共鉴定出440个分离株的O血清型。这些分离株覆盖了60个血清型,但以O18、O78、O2、O88、O11、O26、O4、O1、O127和O131等10个血清型为主,共264株,占定型菌株的60%;前6种血清型在种类上只占定型菌株血清型总数的10%,却拥有204个分离株,占定型菌株的46.36%。因此,可以认定O18、O78、O2、O88、O11、O26等6个血清型为优势血清型。取来自不同地区的优势血清型分离株60个,2 扬州大学博士学位论文以每株 10’菌落形成单位(CFU)细菌气管内接种 1日龄无特定病原体(SPF)鸡6羽,根据接种后7天内发生死亡和病变鸡的比例,确定出高致病株、中度致病株和低致病株分别为 83.33O、10%和 6.67%;其它常见血清型 O4、OI、O127和O131分离株30个和非常见血清型分离株10个,按同样方法接种1日龄易感鸡6羽,高致病株、中度致病株和低致病株分别为 90%、10%和 0%。结果表明:我们所收集的分离株均有致病性,其中,83%以上的分离株属高致病株,其他为中度和低致病株。 测定了从我国 18个省、市、自治区分离到的 204个禽病原性大肠杆菌优势血清型分离株的外膜蛋白型(outer membrane pfotein pattem,OMP型人这些分离株共产生T 4个 OMP型,56个 O18分离株可分为 3个 OMP型,54个 O78分离株、28个OZ分离株、26个O88分离株、22个* 分离株和18个O26分离株,分别出现了4、2、l、3和1个OMP型。其中,OMP-l型为6个血清型所共有,OMP-3型则同时存在于* 8、O78、OZ和** 分离株中。结果表明,优势血清型中,O18、O78、OZ和Oil分离株具有多样性的OMP型,而O88、O26分离株的OMP型则高度一致,所测6个优势血清型的分离株间存在共同的OMP型。二、鸡大肠杆菌病免疫保护机理的实验研究 以禽病原性大肠杆菌 OIS、O78分离株制成超声波裂解铝佐剂灭活疫苗兔疫14日龄鸡,以相同或不同外膜蛋白型(OMP型)的O18、O78分离株攻毒。结果表明:078血清型中相同和不同OMP型分离株间均能获得最大保护:018血清型中相同*MP型分离株间获得最大保护,而不同*MP型分离株间不能保护: D上述两个血清型的分离株间不论 OMp型是否相同,均缺乏保护。: 以自行建立的间接ELISA试验、常规间接血凝试验分别测定了试验鸡临攻毒前针对大肠杆菌 OMPs和脂多糖口,LPS)的抗体。结果表明:免疫组鸡血清中上述两种抗体明显高于攻毒对照组;在免疫组,存活鸡临攻毒前血清中上述两种抗体滴度恒高于死亡鸡,但除3个组外,多数组差异不显著:攻毒对照组这一关系不稳定。以上结果说明:禽大肠杆菌疫苗的免疫保护,主要与O血清型有关,部分与 OMP型有关,如 OIS分离株;免疫保护性抗原含 OMPS和LPS等多种抗原成分的表位。 高进:禽大肠杆菌病流行病学、免疫保护机理和与低致病禽流感病毒的致病协同3 从禽源性大肠杆菌 037株提取 OMPs、LPS后,分别以含 Zing、ling OMPs的 油乳剂苗于 2周龄、4周龄时分别免疫易感鸡,在免疫鸡 5周龄时以 10’菌落形成 单位(CFU)037株攻毒,结果2个组的免疫保护效力分别为 94厂4%和 78.95%。 以含 0二singI.125mg LPS的油乳剂苗同法免疫后攻毒,其免疫效力分别为 36.84% 和 31.58%;以含 1.25帖 OWS+0.125mg LPS的油乳剂茵同法免疫和攻毒,免疫 效力为84.ZI% 以含2.5 X m’CFU灭活的全菌油乳剂苗免疫后攻毒,免疫保护 效力为78.95%。上述结果表明,外膜蛋白、脂多糖具有免疫保护作用。 三、低致病性禽流感病毒以及新域疫和传染性支气管炎等疫苗病毒与 禽病原性大肠杆菌间的协同致病作用 以 2种剂量的低致病性禽流感病毒(mildly path
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