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胰蛋白酶抑制剂(TI)是豆粕中重要的抗营养因子,它抑制人和动物肠道内胰腺分泌的蛋白水解酶活性,动物采食含TI的日粮后导致其采食量和日增重下降,饲料转化率降低,引起胰腺增生和肥大、生长停滞等问题。ELISA具有选择性好、灵敏度高、结果判断客观准确、实用性强等特点,弥补了经典化学法和其他仪器分析法的不足,目前在饲料安全性检测、质量评价中的研究和应用越来越多。本研究采用与胰蛋白酶偶联的CNBr-activated Sepharose 4B通过一步亲和层析法分离纯化大豆TI,得到两个洗脱峰。酶化学方法检测1号峰比活力为2317 TIU/mg,纯化倍数为原液的115倍；2号峰比活力为5657 TIU/mg,纯化倍数为原液的283倍。经SDS-PAGE检测,2号峰表现为20KDa的单一条带,收集到的蛋白为KTI。1号峰没有条带出现,推测1号峰收集到的蛋白可能为BBI,因为BBI类抑制剂的分子量为6～10KDa,在大分子蛋白胶中未能显现条带。以大豆KTI为抗原采用足掌、胭窝淋巴结、背部及颈部皮下多点的综合免疫途径免疫新西兰兔,成功制备了高特异性的多克隆抗体。继而以此抗体为核心试剂,建立了间接竞争ELISA检测方法,标准曲线线性方程为：y=20.841x+50.961,R2=0.9941。选择0.05mol/L pH8.2 Tris-HCl缓冲液为样品浸提液,将KTI纯品以0.8μg/ml, 1.6μg/ml,2.4μg/ml的浓度分别添加到豆粕中,其回收率为93.7%～104.9%,变异系数为2.8%～5.1%。经不同热处理的大豆粉及KTI纯品用酶化学方法和本方法对比后呈现较好的一致性。本研究方法特异性和准确度较高,为发酵豆粕产品的质量稳定提供可靠的监控手段,同时也为饲料企业对发酵豆粕产品的选择提供分析方法。