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目的:观察骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）静脉移植对六价铬[Cr（Ⅵ）]致大鼠肝脏损伤的修复作用,探讨BMSCs是否通过SIRT1/HIF-1α途径减少内质网应激介导的细胞凋亡修复肝脏损伤的机制。方法:采用全骨髓贴壁的方法分离、纯化、培养BMSCs,应用流式细胞仪检测其细胞周期和表面标志CD45和CD90,应用成脂诱导液诱导其向脂肪细胞分化,油红O染色鉴定。24只Wistar大鼠被随机分成对照组、模型组和细胞治疗组,每组8只,通过腹腔注射的方式分别给予含0、0.4和0.4 mg/kg.bw Cr6+的重铬酸钾盐溶液,每周染毒5次,连续染毒30天。染毒结束后,细胞治疗组大鼠在24h和48 h经球后静脉移植氯甲基苯甲酰胺（CM-Dil）标记的BMSCs,每次0.1 mL细胞悬液（5×106个细胞）,对照组和模型组给予同体积的磷酸缓冲盐溶液。观察大鼠饮食饮水状况和精神状态。2周后杀死大鼠,检测血清ALT（Alanine aminotransferase）和AST（Aspartate aminotransferase）水平;取出肝脏进行HE染色观察肝脏病理组织学改变;火焰原子吸收法检测肝脏内铬含量;激光共聚焦显微镜观察BMSCs在大鼠肝脏的定植情况;检测氧化应激相关指标MDA的含量和SOD的活性;TUNEL法检测肝组织细胞凋亡;Western blot法检测SIRT1、HIF-1α以及内质网应激介导的凋亡相关蛋白Grp78、ATF6、Cleaved-caspase12、CHOP、Bcl-2和Bax的表达;免疫组织化学法检测SIRT1、HIF-1α、Grp78、ATF6、Cleaved-caspase12和CHOP蛋白的表达。结果:第3代BMSCs形态较单一呈长梭形,排列规则有序。经流式细胞仪检测84.40%的细胞处在G1期,高表达CD90,几乎不表达CD45。成脂诱导21天后油红O染色阳性。细胞治疗2周后,细胞治疗组大鼠精神状况有所改善,饮食饮水状况明显改善。肝脏大体观察可见模型组肝脏质地变硬,边缘圆顿明显,细胞治疗组肝脏有所好转,边缘略有圆顿。全自动血液生化仪检测显示,细胞治疗组AST和ALT显著高于对照组而低于模型组（P<0.05）。HE染色可见对照组肝组织结构规则,肝细胞排列成条索状,而模型组肝组织大量炎细胞浸润,空泡化,细胞坏死,肝血窦扩张,治疗组相比于模型组明显好转。TUNEL检测结果显示,模型组和细胞治疗组肝脏的凋亡细胞率显著高于对照组（P<0.05）,而细胞治疗组凋亡率低于模型组（P<0.05）。模型组和细胞治疗组肝脏的MDA含量显著高于对照组,细胞治疗组MDA含量显著低于模型组（P<0.05）;SOD的活性,模型组和细胞治疗组显著低于对照组（P<0.05）,细胞治疗组显著高于模型组（P<0.05）。免疫组织化学和Western blot结果显示细胞治疗组SIRT1表达显著高于另外两组,HIF-1α和内质网应激介导凋亡的相关蛋白Grp78、ATF6、CHOP、Cleaved-caspase12、Bax的表达低于模型组显著高于对照组,Bcl-2显著高于模型组低于对照组（P<0.05）。激光共聚焦显微镜观察到CM-Dil标记的BMSCs定植于治疗组大鼠肝脏。结论:Cr（Ⅵ）可以引起大鼠肝脏损伤,BMSCs能够定植于大鼠肝脏并具有修复大鼠肝损伤的作用,修复机制可能与SIRT1/HIF-1α减少了内质网应激介导的细胞凋亡有关。
