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目的探讨PARP1在β-拉帕醌杀伤人AGS胃癌细胞珠中的作用及分子机制。方法1.选择人AGS胃癌细胞株,设计并合成3个针对靶基因PARP1的siRNA寡核苷酸基因片段,以及阴性对照组NC-siRNA,采用常规瞬时转染的方法干扰PARP-1 表达。2.转染后分别对4组加入4μmol/L的β-拉帕醌,采用Western blot实验检测四组PARP1裂解产物蛋白的表达变化,采用方差分析进行比较,筛选出稳定的转染细胞株;3.选取已筛选出的siRNA重新转染AGS细胞珠,同时设置阴性对照组NC-siRNA组;采用MTT实验及平板克隆实验分别检测目的基因转染组(PARP1-siRNA转染组)、NC-siRNA对照组中β-拉帕醌对AGS细胞珠增殖及克隆能力的影响;用划痕实验检测PARP1-siRNA转染组、NC-siRNA对照组中β-拉帕醌对AGS细胞珠迁移能力的影响。结果1.AGS胃癌细胞珠转染后的转染效率:在显微镜下观察转染后48h的细胞形态,与阴性对照组相比,PARP1基因经siRNA抑制表达后在形态上未见明显改变,贴壁生长,呈圆形,可见PARP1基因沉默对细胞的形态生长无显著的影响。Western blot检测转染(已加入4μmol/Lβ-拉帕醌)’后72h目的基因PARP1裂解产物蛋白的表达:与NC-siRNA对照组相比,siRNA组PARP1的裂解产蛋白的表达显著降低,PARP1-siRNA 1 下降了 89%(P<0.01),PARP1-siRNA 2 下降了 73%(P<0.05),PARP1-siRNA3下降了 83%(P<0.05),与另外三组相比,转染后蛋白表达水平较低的是PARP1-siRNA 1组,说明PARP1-siRNA 1是最有效和最特异的序列,可以用于干扰沉默PARP1基因的表达,并用于后续实验。2.PARP1-siRNA转染对AGS细胞珠增殖、克隆及迁移能力的影响:MTT、平板克隆实验、划痕实验可以观察到β-拉帕醌可显著抑制NC-siRNA对照组组细胞的增殖、克隆及迁移能力,而对PARP1-siRNA转染组的抑制效果明显减弱;siRNA沉默PARP1基因表达后可显著降低β-拉帕醌对胃癌细胞的杀伤力。结论1.使用RNA干扰技术可以成功抑制AGS胃癌细胞珠中PARP 1基因的表达。2.过度活化的PARP1在β-拉帕醌杀伤胃癌细胞中发挥着关键作用。