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本论文建立了以硫酸对氨基N,N-二乙基苯胺为底物测定辣根过氧化物酶伏安酶(HRP)的电化学酶联免疫分析法。
首先,系统地研究了用硫酸对氨基N,N-二乙基苯胺(DEPPDA)-H2O2-HRP电化学酶联免疫分析新体系测定HRP的方法。H2O2在HRP的催化作用下能氧化DEPPDA生成N,N二乙基对醌二亚胺硫酸盐,该物质在滴汞电极上-0.35V(vs.SCE)左右产生还原波,借助此波可以测定HRP及其标记物。测定游离HRP的线性范围为8.0×10-11~1×10-9g/mL,检测限4.8×10-11g/mL。
然后,利用紫外-可见光谱法、红外光谱法、线性扫描伏安法以及循环伏安法,对酶催化反应机理及反应产物的电极还原过程进行了详细的探讨。结果表明:酶催化反应最终产物为N,N-二乙基对醌二亚胺硫酸盐,该物质在汞电极上发生两电子还原反应。
最后,将本文建立的伏安酶联免疫分析体系与酶联免疫吸附间接法相结合,用于测定烟草花叶病毒(TMV)提纯液,线性范围为15~7600ng/mL,检出限为15ng/mL,分析结果满意。