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前言 随着近几年小鼠基因组操作技术的发展和小鼠基因组测序的完成，可诱导转基因，基因打靶，条件基因打靶以及基因捕获等技术在自发肿瘤小鼠模型的应用促使国内外建立了不少肺癌小鼠模型。目前条件基因打靶技术使用最为广泛，根据重组酶的不同分为Cre-LoxP和Flp-Frt系统。借助Cre-LoxP系统条件性敲除目的基因，可以降低某些生存必须基因缺失造成小鼠死亡的风险，另外还可对基因进行特定激活，了解基因的正向作用。目前应用于肺癌转基因小鼠模型启动下游序列的启动子可分为两种:1、组成性表达启动子，如keratin-5;2、特异性启动子，如肺泡2型细胞特异表面活性蛋白SPC，Clara细胞分泌蛋白的启动子CCSP，钙降素基因相关肽启动子CGRP。我们以SPC为特异启动子构建SPC-Cre转基因小鼠，应用qRT-PCR、westernblot、LacZ染色等方法检测Cre重组酶在小鼠的肺泡上皮和支气管上皮细胞中的特异表达。 方法 1.构建SPC-Cre转基因载体。 2.转基因表达载体SPC-Cre注射片段显微注射，制备SPC-Cre转基因鼠。 3.PCR方法筛选SPC-Cre转基因鼠子代鼠和SPC-Cre;ROSA子代小鼠。 4.实时PCR，Westernblot检测Cre重组酶在SPC-Cre转基因鼠各组织的表达。 5.LacZ染色检测SPC-Cre;ROSA小鼠肺泡上皮细胞中Cre重组酶的活性。 结果 1.SPC-Cre转基因载体酶切电泳图与预测相同，测序显示Cre片段前成功连接Kozak序列和NLS序列。 2.大量繁殖SPC-Cre转基因小鼠和SPC-Cre;ROSA小鼠。 3.实时PCR，Western结果显示SPC-Cre转基因鼠肺、肠组织Cre表达比其他组织高。 4.SPC-Cre;ROSA26双转基因小鼠肺上皮细胞有明显的LacZ染色产生的特异蓝色，Cre重组酶活性较高，其他组织未见特异蓝色。 结论 SPC启动子可以指导Cre重组酶在转基因小鼠肺上皮细胞中表达。该小鼠可以用于肺上皮细胞以及表达SPC细胞的示踪和谱系分析。