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近视是眼科常见的多发病之一，关于其的发病机制人们曾经提出多种假说，其中形觉剥夺学说是研究热点。形觉剥夺性近视(form deprivation myopia，FDM)可出现与人类病理性近视相似的特征性改变，如眼轴延长、玻璃体腔扩张、视网膜、脉络膜萎缩变性、颞侧弧形斑等，但形觉剥夺导致近视的机制尚未完全阐明。近年来的研究显示，视网膜上多种神经递质与生物分子参与了出生后眼球生长的调控，在形觉剥夺性近视形成过程中发挥作用。脑源性神经营养因子(brain derivedneurotrophic factor，BDNF)是80年代初发现的神经营养素家族中的重要成员之一，具有广泛的神经营养作用，日益受到诸多学者的重视。有研究表明，单眼剥夺可使剥夺眼对侧皮质内BDNFmRNA及剥夺眼视网膜神经节细胞BDNF的表达水平下降，而且提供外源性BDNF可中和单眼剥夺的效应，提示BDNF在形觉剥夺中发挥重要作用，参与了FDM的形成，但其具体的作用机制未明。 本实验采用形觉剥夺方法建立鸡近视眼模型，并将剥夺眼去遮盖继续饲养2周，观察近视恢复情况，应用免疫组织化学技术检测鸡视网膜BDNF的表达水平，观察在FDM形成及恢复过程中BDNF的变化情况，探讨BDNF在FDM中的作用机制，对近视的发病机制作进一步的研究，从而为形觉剥夺性近视的防治提供新的思路。郑州大学2以科年硕士毕业论文BDNF在形觉剥夺性近视形成与发展中作用的研究材料与方法 选用出生后1天的健康雄性海兰鸡雏驼只，于正常瞳孔下(未行睫状肌麻痹)检影验光，淘汰先天近视眼鸡雏，于第2天将右眼以半透明眼罩遮盖作为形觉剥夺眼，左眼不作任何处理为对照眼。室内人工饲养，保持室温在28℃一32℃，自然昼夜节律。所有鸡雏随机分为4组，A组为遮盖1周，B组为遮盖2周，C组遮盖2周后去遮盖继续饲养1周，D组为遮盖2周后去遮盖继续饲养2周。每组鸡雏在预定的时间于正常瞳孔下检影验光，确定剥夺眼与对照眼的屈光状态。摘除眼球后，游标卡尺测量眼轴长及赤道径。测量完毕后，放入新鲜配制的4%多聚甲醛缓冲液中4℃固定20h，常规梯度酒精脱水，石蜡包埋，作如m的石蜡切片。常规HE染色，光学显微镜下形态学观察。采用过氧化物酶标记的链霉卵白素蛋白一生物素过氧化物酶(streptaridin一peroxidase，sp)免疫组化技术，检测鸡视网膜BDNF的表达水平。结果1.眼罩遮盖1周可使剥夺眼形成明显近视，剥夺眼(一9.88士0.95D)与对照眼 (0.75士0.46D)相比屈光度差异有非常显著统计学意义(尸<0.001)。随遮盖时间延长，对照眼剥夺眼的负性屈光度逐渐增加，在遮盖2周时为(一17.16功.67D)，(0 .56士0.32D)则趋向正视化，二者之间差异具有非常显著性统计学意 义(尸<0.001)。去遮盖后原剥夺眼的近视程度有所减轻，随着去遮盖时间的延 长，负性屈光度逐渐减少，在去遮盖2周时，原剥夺眼(一8.13士0.61D)与对 照眼(0.13土0.35D)相比差异仍具有非常显著统计学意义(尸<0.001)。2.眼罩遮盖1周可使剥夺眼眼轴长及赤道径明显增长，与对照眼相比差异具有非 常显著性统计学意义(尸<0.001)。随着时间的延长，双眼眼轴长及赤道径均不 断增长，剥夺眼的增长速度远远快于对照眼，在遮盖2周时剥夺眼眼轴长及赤 道径与对照眼相比差异具有非常显著性统计学意义(尸<0.001)。去遮盖后，原 剥夺眼眼轴长及赤道径仍存在增长趋势，但增长速度减慢，在去遮盖2周时， 与对照眼相比差异具有非常显著性统计学意义(尸<0.001)。3.形态学观察发现与对照眼相比剥夺眼后极部视网膜变薄，尤以内核层、内丛状 层、神经纤维层显著，后极部巩膜软骨层变厚，纤维层变薄。郑州大学20()4年硕士毕业论文BDNF在形觉剥夺性近视形成与发展中作用的研究4.BDNF阳性细胞SP法均表现为胞浆中出现棕黄色颗粒，胞核不着色。在视网 膜BDNF主要分布在神经节细胞层和内核层，因内核层阳性细胞数较少，呈散 在分布，本次实验仅对神经节细胞层的阳性细胞计数。遮盖2周后神经节细胞 层每高倍镜视野BDNF阳性细胞数剥夺眼(14.05士0.58)较对照眼(25.95士0.55) 明显减少，且染色程度明显减弱，二者间差异具有非常显著性统计学意义 (P<0.OOI)。去遮盖2周后神经节细胞层每高倍镜视野BDNF阳性细胞数原剥 夺眼(24.58士0.29)与对照眼(26.53士0.61)相比仍处于较低水平(P<O.001)， 但与遮盖2周相比明显增加，差异具有非常显著性统计学意义(尸<0.001)。结论1.本研究通过眼罩遮盖的方法成功的建立了鸡FDM模型。2.形觉剥夺可使剥夺眼产生明显的轴性近视，去除剥夺因素后近视程度可减轻， 说明在鸡视觉发育期由形觉剥夺造成的近视是可逆的。3.形觉剥夺可使剥夺眼后极部视网膜变薄，巩膜软骨层变厚，纤维层变薄。4.视网膜BDNF的下调和FDM的形成以及BDNF的升高和FDM的恢复之间存 在着伴随关系，说明BDNF参与了FDM的形成。5.如在视觉发育敏感期内去除形觉剥夺因素或提供外源性BDNF有希望可逆转形 觉剥夺造成的视力损害。