论文部分内容阅读
目的:在胸、腹主动脉瘤等大血管手术中,时常发生脊髓缺血再灌注损伤(Spinal Cord Ischemia-Reperfusion Injury,SCIRI)。SCIRI的预后不良,可导致截瘫甚至死亡。其发病机制复杂,转录水平相关的分子机制尚未明确。研究方法:通过夹闭主动脉弓14min,建立脊髓缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)模型。(1)随机分为对照组(Sham组)、缺血再灌注组(IR-12h组、IR-24h组、IR-36h组、IR-48h组),通过Tarlov运动评分评估大鼠后肢运动功能,qRT-PCR和Western Blot探究miR-29b-3p与Bcl-2蛋白修饰因子(BMF)表达之间的关系。(2)随机分为IR+miR-29b control组、IR+miR-29b mimic组,通过鞘内注射miR-29b-3p模拟物,观察其对BMF mRNA和蛋白表达水平的影响。(3)随机分为Sham组、IR-36h组,使用带有NeuN、GFP、Iba-1的双重免疫荧光,观察BMF在脊髓细胞中的分布。(4)随机分为Sham组、IR组、IR+mi R-29b control组、IR+miR-29b mimic组,通过Tarlov评分、伊文思蓝(EB)染色法、TUNEL法评估SCIRI,通过qRT-PCR、Western Blot检测BMF、Bax和cleaved casepase 3的表达水平。(5)鞘内注射腺病毒(adenovirus,Adv)用来沉默BMF表达。随机分为IR+Adv-NC组、IR+Adv-shRNA-BMF组,通过伊文思蓝法、TUNEL法评估SCIRI,通过qRT-PCR、Western Blot检测BMF、Bax和cleaved casepase 3的表达水平。使用带有BMF和Bax的双重免疫荧光,观察BMF和Bax在脊髓细胞中的分布。结果:(1)IR后miR-29b-3p的表达失调。与Sham组相比,IR后miR-29b-3p的表达显著降低,BMF mRNA和蛋白的表达水平显著增加(P<0.05)。(2)过表达miR-29b-3p后显著抑制了BMF mRNA和蛋白表达(P<0.05)。mi R-29b-3p可能通过靶向结合BMF mRNA导致其基因沉默。(3)和Sham组相比,IR组BMF荧光表达明显增加(P<0.05),且BMF主要在脊髓神经元中表达。(4)和IR组相比,过表达miR-29b-3p,大鼠后肢运动功能评分明显增加,血脊髓屏障(Blood-spinal cord barrier,BSCB)通透性降低,大鼠脊髓细胞凋亡率下降,BMF、Bax、casepase 3的蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。(5)沉默BMF,IR后BSCB通透性降低,细胞凋亡率降低,凋亡通路BMF/Bax/casepase3蛋白的表达水平显著降低(P<0.05)。结论:miR-29b-3p可能通过靶向结合BMF mRNA导致其基因沉默。miR-29b-3p可以通过靶向结合BMF,抑制凋亡通路BMF/Bax/casepase 3的蛋白表达水平,减轻IR后脊髓损伤。