目的:明确Toll信号通路中重要信号分子TLR4在神经元生长中起到的关键作用,并阐明其与TLR4信号通路胞外分子MD-2的关系。方法:1、在低分化PC12细胞中进行免疫荧光组织化学,观察TLR4的表达。2、在动物水平,对出生后不同时期大鼠,P1、P2、P4、P6、P8、P14以及成年大鼠脑组织进行冰冻切片,免疫荧光组织化学观察脑组织神经元中TLR4的表达。3、在细胞水平,(1)采用神经元原代培养,观察培养第2天、第4天、第6天、第8天、第10天及第12天神经元细胞的生长状态;(2)对培养第2天、第4天、第6天、第8天、第10天及第12天的神经元进行免疫荧光组织化学,鉴别神经元纯度以及观察TLR4在神经元生长不同时期中的表达与分布;(3)提取原代神经元培养第2天、第4天、第6天、第8天、第10天及第12天RNA,进行RT-PCR扩增,测定原代神经元生长不同时期TLR4相对表达量。4、神经元原代培养时加入TLR4/MD2抑制剂,抑制信号通路的激活,观察不同时期神经元的生长状态,探索TLR4受体胞外信号分子MD-2对神经元生长的作用。结果:1、TLR4在PC12细胞中有表达,且主要分布在细胞质及突起中。2、冰冻切片免疫荧光组织化学结果显示脑组织中有神经元的表达,且TLR4在P1、P2及P14脑组织神经元中有高表达,在成年鼠脑组织神经元中也有一定的表达。3、原代神经元培养中神经元具有一定的生长周期,从开始长出突起到突起生长形成复杂的网络再到突起、胞体衰退降解;这个生长周期中TLR4的含量先增加后减少。4、TLR4/MD2抑制剂能抑制神经元细胞的生长。结论:1、TLR4对神经元生长是不可缺少的。2、TLR4对神经元生长的作用是通过TLR4胞外信号分子MD-2激活信号通路来发挥作用的。