尖孢镰刀菌蛋白激发子PeFOCl分离纯化及其诱导植物免疫抗性机理研究

来源 :海南大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:qianjun0412064
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激发子是一类具有诱导植物产生免疫防御反应的物质,先前研究主要集中在诱导植物抗病方面,随着研究的深入,研究者们发现激发子在诱导植物抗虫,抗逆境,促进作物生长和改善品质方面也具有重要作用。植物在长期的进化过程中,为应对外界环境逆境胁迫,抵御病原微生物侵染,进化出一套有效的免疫系统来感知逆境和病原微生物。植物利用其细胞表面识别受体将感知信号转化为传导信号,通过细胞级联反应将受体信号传导至植物细胞核内,调节植物细胞核内相关抗性基因表达,诱导细胞次生代谢物质积累,激活植物免疫防御系统性抗性。目前,蛋白激发子与植物免疫互作已经成为研究热点,但其诱导植物免疫防御及互作机理尚不十分清楚。本论文利用硫酸铵沉淀技术和蛋白分离纯化技术从尖孢镰刀菌古巴专化性菌株发酵液中分离纯化出一种蛋白激发子,并命名为:the first Protein Elicitor from Fusarium oxysporum f.sp.cubense,PeFOC1,该蛋白激发子能够诱导烟草过敏反应,通过质谱鉴定,获得该蛋白的基因序列,通过基因克隆、转化和原核表达技术,获得具有生物活性的重组蛋白激发子,使用蛋白处理烟草叶片和悬浮细胞,确定新型重组蛋白激发子PeFOC1具有引起烟草早期免疫反应的能力,如活性氧爆发和NO积累,应用qRT-PCR技术检测烟草植株内抗性基因表达情况,使用PeFOC1处理烟草植株,诱导烟草拮抗烟草花叶病毒(TMV)和丁香假单孢杆菌(P.syringae),使用蛋白激发子PeFOC1喷雾处理水稻,结果表明其能够诱导水稻抗旱性,同时使用蛋白激发子PeFOC1处理香蕉幼苗,结果表明能够诱导香蕉幼苗抵御香蕉枯萎病菌抗性。这些研究表明重组蛋白PeFOC1能够诱导植物广谱系统性抗性。利用转录组RNA-seq和蛋白组Label-free技术,研究蛋白激发子PeFOC1诱导水稻系统性免疫抗性机制,利用蛋白激发子PeFOC1喷雾处理水稻幼苗,以牛血清蛋白(BSA)为对照,分别取处理8 h,16 h,24 h后水稻叶片样品,并分别提取水稻样品总RNA和总蛋白,进行转录组和蛋白组测序,经生物信息学分析,筛选出处理组与对照组之间的差异基因和差异蛋白,通过GO和KEGG富集分析明确了差异基因和差异蛋白涉及到的免疫通路,使用转录组和蛋白组联合分析技术,筛选出涉及到的关键显著差异基因或蛋白,分析了蛋白激发子诱导水稻免疫反应中的激素相关通路,转录因子,植物与病原菌互作,植保素类次级代谢,光合作用和糖类代谢通路等,从整体上探究植物应对蛋白激发子产生免疫防御反应的作用机制。通过qRT-PCR验证蛋白激发子PeFOC1诱导水稻相关差异基因和差异蛋白可靠性,通过生物学实验验证PeFOC1诱导水稻免疫相关酶活性,激素和木质素积累,以及水稻根系活力增强。通过研究蛋白激发子PeFOC1诱导植物免疫防御反应机制,进一步揭示了植物自身免疫防御系统的机制机理,为研究植物和病原菌免疫互作提供理论依据,为进一步开发植物免疫诱导剂奠定物质基础。
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