论文部分内容阅读
目的:
通过流式细胞分选技术从胃癌BGC-823细胞中分选出侧群细胞,采用响应曲面分析法探讨5-氟尿嘧啶不同温热化疗条件对胃癌BGC-823细胞及其侧群细胞增殖的影响,为临床实践中5-FU温热化疗提供一定的理论指导。
方法:
1.侧群细胞分选与鉴定:运用流式细胞荧光分选技术,分选出胃癌细胞株BGC-823细胞的SP细胞(Side Population,SP)和非侧群细胞(Non-Side Population,NSP),再利用细胞抑制率试验(MTT)检测细胞增殖能力、流式细胞技术(FACS)测定细胞分化能力、细胞划痕实验测定细胞迁移能力、Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,对比研究SP细胞和NSP细胞的生物学特性。
2.5-FU温热化疗对胃癌BGC-823细胞及其SP细胞增殖的影响:通过单因素分析确定不同药物浓度、不同孵育温度、不同孵育时间对胃癌BGC-823细胞及其SP细胞增殖的影响。采用响应曲面分析法,运用Design-export软件对各指标数值进行整合,构建三维响应曲面图进行交互作用分析,优化得出最佳的温热化疗条件。对优化得出的最佳温热化疗条件进行验证试验。
结果:
1.在胃癌细胞株BGC-823中分选得到2%左右的SP细胞,在经过3天的孵育后SP细胞开始快速增殖,而且能通过不对称分裂的方式快速进行自我更新;MTT法观察胃癌细胞株BGC-823的SP细胞和NSP细胞,SP细胞经过3天的孵育后开始快速增殖,直至第7天仍未到达增殖平台期,而NSP细胞一直处于缓慢生长状态;划痕实验结果表明,相较于NSP细胞组,SP细胞组划痕宽度明显变窄;Transwell小室实验结果显示,SP细胞组的细胞数远多于NSP细胞组中的细胞数。
2.经过整合分析发现,5-FU药物浓度、孵育时间、孵育温度这三个因素对BGC-823细胞及其SP细胞的增殖均有影响,其影响顺序为:药物浓度(x1)>孵育时间(x2)>孵育温度(x3),其中孵育时间与孵育温度之间的交互作用很明显。应用Design-export软件优化后的温热化疗条件为:药物浓度16000μg/ml、孵育时间20min、孵育温度40℃。对优化后的温热化疗条件进行的3次验证试验结果显示,BGC-823细胞和SP细胞的抑制率分别可以达到40.18%和43.57%,较模型预测值偏差仅0.85%和0.91%。
结论:
1.在胃癌细胞BGC-823中,存在少量SP细胞,相较于NSP细胞,SP细胞具有更强的增殖、分化、迁移及侵袭能力。
2.温热化疗能够增强5-FU对BGC-823细胞的抑制作用,其机制可能是温热化疗抑制了SP细胞增殖。
通过流式细胞分选技术从胃癌BGC-823细胞中分选出侧群细胞,采用响应曲面分析法探讨5-氟尿嘧啶不同温热化疗条件对胃癌BGC-823细胞及其侧群细胞增殖的影响,为临床实践中5-FU温热化疗提供一定的理论指导。
方法:
1.侧群细胞分选与鉴定:运用流式细胞荧光分选技术,分选出胃癌细胞株BGC-823细胞的SP细胞(Side Population,SP)和非侧群细胞(Non-Side Population,NSP),再利用细胞抑制率试验(MTT)检测细胞增殖能力、流式细胞技术(FACS)测定细胞分化能力、细胞划痕实验测定细胞迁移能力、Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,对比研究SP细胞和NSP细胞的生物学特性。
2.5-FU温热化疗对胃癌BGC-823细胞及其SP细胞增殖的影响:通过单因素分析确定不同药物浓度、不同孵育温度、不同孵育时间对胃癌BGC-823细胞及其SP细胞增殖的影响。采用响应曲面分析法,运用Design-export软件对各指标数值进行整合,构建三维响应曲面图进行交互作用分析,优化得出最佳的温热化疗条件。对优化得出的最佳温热化疗条件进行验证试验。
结果:
1.在胃癌细胞株BGC-823中分选得到2%左右的SP细胞,在经过3天的孵育后SP细胞开始快速增殖,而且能通过不对称分裂的方式快速进行自我更新;MTT法观察胃癌细胞株BGC-823的SP细胞和NSP细胞,SP细胞经过3天的孵育后开始快速增殖,直至第7天仍未到达增殖平台期,而NSP细胞一直处于缓慢生长状态;划痕实验结果表明,相较于NSP细胞组,SP细胞组划痕宽度明显变窄;Transwell小室实验结果显示,SP细胞组的细胞数远多于NSP细胞组中的细胞数。
2.经过整合分析发现,5-FU药物浓度、孵育时间、孵育温度这三个因素对BGC-823细胞及其SP细胞的增殖均有影响,其影响顺序为:药物浓度(x1)>孵育时间(x2)>孵育温度(x3),其中孵育时间与孵育温度之间的交互作用很明显。应用Design-export软件优化后的温热化疗条件为:药物浓度16000μg/ml、孵育时间20min、孵育温度40℃。对优化后的温热化疗条件进行的3次验证试验结果显示,BGC-823细胞和SP细胞的抑制率分别可以达到40.18%和43.57%,较模型预测值偏差仅0.85%和0.91%。
结论:
1.在胃癌细胞BGC-823中,存在少量SP细胞,相较于NSP细胞,SP细胞具有更强的增殖、分化、迁移及侵袭能力。
2.温热化疗能够增强5-FU对BGC-823细胞的抑制作用,其机制可能是温热化疗抑制了SP细胞增殖。