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目的：探讨WWOX基因在鼻咽癌细胞中的生物学功能及其分子机制。 方法：1.设计并包装含WWOX基因片段和空载片段的慢病毒载体。分别将携有WWOX基因片段和空载片段的慢病毒载体通过体外基因转染鼻咽癌细胞株CNE1构建实验组CNE1/WWOX和空载组CNE1/CON，稳定转染后的细胞进行扩增培养。其中以转染空载片段的慢病毒载体(空载组CNE1/CON)及未经转染（空白对照组CNE1）的细胞作为对照。在转染72h后，在倒置荧光显微镜下进行观察、拍照并计算转染效率。借助于实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western Blot，WB)分别测定三组细胞中WWOX的mRNA和WWOX蛋白的表达。2.分别用划痕实验和/或Transwell迁移实验以及Transwell侵袭实验研究WWOX过表达对三组细胞迁移及侵袭能力的影响。用RT-PCR检测三组细胞中E-cadherin的mRNA的表达。3.通过平板克隆形成实验、四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法来检测三组细胞的生长、增殖能力。用流式细胞仪来检测三组细胞周期的变化及用AnnexinⅤ-APC/7-AAD双荧光标记细胞凋亡实验来分别检测三组细胞的细胞凋亡的变化。用Western Blot检测AKT、p-AKT、Caspase-3、Cleaved Caspase-3蛋白表达。 结果：1.CNE1/CON和CNE1/WWOX的转染效率分别为96.7±0.7％、95.8±1.0％。RT-PCR实验结果显示，CNE1、CNE1/CON和CNE1/WWOX中WWOX的mRNA相对表达量分别为1.000±0.001、1.010±0.041和104.691±0.418，实验组较空载组和空白对照组WWOX的mRNA相对表达量明显增高，差异有统计学意义（P＜0.05）。Western blot检测结果显示CNE1、CNE1/CON和CNE1/WWOX中WWOX蛋白相对表达量分别为0.151±0.042，0.139±0.10和1.263±0.195，实验组较空载组和空白对照组WWOX的蛋白相对表达量明显升高，差异有统计学意义(P＜0.05）。2.划痕实验结果显示，CNE1、CNE1/CON和CNE1/WWOX相对划痕愈合率分别为(55.67±2.08)％、(58.67±1.15)％和(11.67±1.15)％，实验组较空载组和空白对照组相对划痕愈合率明显减小，差异有统计学意义(P＜0.05)。Transwell迁移实验结果显示，CNE1、CNE1/CON和CNE1/WWOX细胞穿膜数分别为206.8±3.7个，201.4±3.1个和58.8±3.0个，实验组较空载组和空白对照组的细胞穿膜数明显下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。Transwell侵袭实验结果显示CNE1、CNE1/CON和CNE1/WWOX中细胞穿膜数分别为114.2±8.7个，109.0±5.9个，31.0±2.2个，实验组较空载组和空白对照组的细胞穿膜数明显下降，差异有统计学意义(P＜0.05)。RT-PCR检测三组细胞E-cadherin的mRNA表达情况。 结果显示CNE1、CNE1/CON和CNE1/WWOX中E-cadherin的mRNA相对表达量分别为1.000±0.000、1.009±0.015和1.393±0.080，实验组较空载组和空白对照组E-cadherin的mRNA相对表达量增加，差异有统计学意义（P＜0.05）。3.细胞克隆形成实验显示，CNE1、CNE1/CON和CNE1/WWOX中细胞克隆形成率分别为（71.9±3.4）％、（70.1％±2.3）％和（27.9％±1.7）％，实验组细胞生长速度较慢，形成的克隆较小，且其克隆形成率明显少于空载组和空白对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)。MTT实验结果显示，实验当天三组细胞OD值差异无统计学意义（P＞0.05），从第24h开始，实验组OD值明显低于空载组和空白对照组的各时间点，差异有统计学意义（P＜0.05）。用流式细胞仪检测细胞周期，实验结果显示CNE1、CNE1/CON和CNE1/WWOX中G0/G1期的细胞数分别为（62.31±1.26）％、（59.60±1.87）％和(40.95±2.29)％;CNE1、CNE1/CON和CNE1/WWOX中G2/M期的细胞数分别为（8.38±0.23）％、（8.88±0.87）％和(22.06±1.34)％;CNE1、CNE1/CON和CNE1/WWOX中S期的细胞数分别为(29.30±1.48)％、(31.52±1.28)％和(36.99±1.78)％，实验组较空载组和空白对照组G0/G1期的细胞数明显下降，差异有统计学意义（P＜0.05），实验组较空载组和空白对照组G2/M期的细胞数明显增加，差异有统计学意义(P＜0.05)，而S期在三组细胞中变化不大，差异无统计学意义（P＞0.05）。3.用AnnexinⅤ-APC/7-AAD双染料处理细胞，用流式细胞仪检测细胞凋亡率。实验结果显示CNE1、CNE1/CON、CNE1/WWOX细胞凋亡率分别为（4.13±0.10）％、（4.15±0.04）％和(16.54±0.07)％，实验组较空载组和空白对照组的细胞凋亡率明显增加，差异有统计学意义(P＜0.05)。Western blot检测AKT、p-AKT蛋白和Caspase3、cleaved-Caspase3蛋白表达水平。实验结果显示，CNE1、CNE1/CON和CNE1/WWOX中p-AKT蛋白相对表达量分别为0.842±0.009，0.843±0.010和0.604±0.006，实验组较空载组和空白对照组的p-AKT蛋白相对表达量降低，差异有统计学意义（P＜0.05）;然而，三组细胞中AKT的蛋白相对表达量变化不大，差异无统计学意义（P＞0.05）。CNE1、CNE1/CON和CNE1/WWOX中Caspase3蛋白相对表达量分别为0.548±0.10，0.546±0.008和0.147±0.06，实验组较空载组和空白对照组Caspase3的蛋白相对表达量降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。然而，三组细胞中的cleaved-Caspase3蛋白相对表达量分别为0.285±0.008，0.287±0.007和0.533±0.004，实验组较空载组和空白对照组cleaved-Caspase3蛋白相对表达量增加，差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论：1.成功构建WWOX过表达稳定的实验组CNE1/WWOX细胞株和空载组CNE1/CON细胞株。2.WWOX过表达可使E-cadherin表达上调，抑制鼻咽癌细胞的迁移和侵袭能力。3.WWOX过表达可明显抑制鼻咽癌细胞生长、增殖能力。WWOX过表达可能是通过诱导细胞周期阻滞在G2/M期，从而抑制鼻咽癌细胞增殖。WWOX过表达可能通过激活AKT使p-AKT(Ser473)的蛋白表达水平下调或/和通过激活caspase-3，使cleaved-Caspase3蛋白表达水平上调，从而促进鼻咽癌细胞CNE1的细胞凋亡。