目的：以GV143-EGFP-ECAD和pIRES2-EGFP-ECAD两种质粒分别转染腹膜间皮细胞,并评估转染效率及E-caherin在腹膜间皮细胞中的过表达。方法：(1)以E-cadherin-pcDNA3为基因模板,pIRES2-EGFP、 GV143-EGFP为基因载体,分别构建pIRES2-EGFP-ECAD和GV143-EGFP-ECAD表达载体。将目的基因E-cadherin (ECADE-钙粘蛋白)和基因载体(pIRES2-EGFP and GV143-EGFP)进行双酶切后连接,转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞扩增,利用重组体抗性筛选阳性克隆,阳性克隆细胞进行扩增和提取、酶切鉴定、测序验证。(2)采用阳离子脂质体转染法用两种质粒分别转染腹膜间皮细胞株(HMrSV5),质粒转染分组为转染0h、24h、36h、48h、72h组。(3)在荧光显微镜下观察表达EGFP(增强型绿色荧光蛋白)的细胞数,并计算转染效率(4)HMrSV5细胞株转染后提取各组细胞总RNA,采用RealTime PCR检测各组细胞E-cadherin mRNA的表达水平。采用Western blot及间接免疫荧光检测各组E-cadherin蛋白的表达水平,及空质粒转染组E-cadherin和α-SMA的表达水平结果：(1)构建的pIRES2-EGFP-ECAD、GV143-EGFP-ECAD质粒经测序分析证实,质粒序列无突变,经限制性内切酶酶切后电泳鉴定,显示pIRES2-EGFP-ECAD2条带分别在2.6K和5.4K的位置,GV143-EGFP-ECAD电泳结果显示酶切后2条带分别在4.8K、2.6K左右,证明质粒构建成功。(2)以表达EGFP的细胞数评估转染效率,转染GV143-EGFP-ECAD的细胞仅见36h、48h有少数几个细胞表达EGFP,24h、72h均未见表达。转染pIRES2-EGFP-ECAD的细胞提示转染后24h、36h、48h、72h均可见EGFP表达,36h时表达EGFP的细胞最多,计算转染效率分别为：18%、58%、41%、15%。(3)RealTimePCR结果显示：转染两种ECAD质粒后,ECAD mRNA表达较上调,24小时达到高峰,36h、48h、72h较24h呈时间依赖性下降,但仍高于0h组。Western blot结果显示：转染24小时后,分别使用两组质粒转染的腹膜间皮细胞E-cadherin蛋白表达均在24小时即开始升高,36小时达到高峰,48小时、72小时较36小时低,但仍高于空白对照组。空质粒转染组,在转染72h后E-cadherin蛋白表达降低、α-SMA蛋白表达增高。结论：(1)两种质粒均能使E-cadherin在腹膜间皮细胞中过表达；(2)应用pIRES2-EGFP-ECAD转染腹膜间皮细胞能通过EGFP的表达更好的评估转染效率,为进一步实验提供了可靠依据。本文含