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本研究首次在中国人源蓝氏贾第虫体内发现病毒，对其中的病毒进行了鉴定，测定了蓝氏贾第虫病毒基因组全序列，构建了全长cDNA克隆并在原核系统表达了蓝氏贾第虫病毒GLV1518-2322基因。 蓝氏贾第虫纯培养 首先对我国人源蓝氏贾第虫北京株（BEIJ88／BTMR1／1）进行了体外纯培养，并对虫体形态进行了观察。结果表明，蓝氏贾第虫在TYI-S-33培养基中生长状况良好，传代20次活力不减。用10％的二甲基亚砜冻存的虫种复苏后继续培养，虫体生长特性不变。光学显微镜下，蓝氏贾第虫滋养体呈蝌蚪状，有两个细胞核和四对鞭毛。透射电镜下，蓝氏贾第虫呈半个梨形，前端钝圆，后端逐渐尖细，背面呈半球形，腹面前半部向内凹陷形成吸盘，虫体表面表膜下有许多小空泡。观察到有的虫体内的指纹样结构和变异形态的虫体。蓝氏贾第虫行二分裂无性繁殖。在培养过程中发现了蓝氏贾第虫的包囊形态，包囊为椭圆形，囊壁较厚，囊壁与虫体之间有明显的空隙。 蓝氏贾第虫病毒的鉴定 对我国人源蓝氏贾第虫病毒（GLV）进行了形态特征和生化特性鉴定。结果表明，蓝氏贾第虫病毒为外观球形、直径36nm的dsRNA病毒。该病毒不仅存在于滋养体的细胞质中，也存在于滋养体的细胞核和包囊中。观察到释放至培养基中的病毒粒子、细胞质中空泡周围的病毒粒子和正在形成的病毒衣壳丝。在蓝氏贾第虫总核酸电泳图谱上观察到一个分子量约7.0kb额外病毒带，该核酸不能被DNA酶（100μg／ml）降解，但可被RNA酶（10μg／ml）降解。在蓝氏贾第虫病毒保守区合成一对引物进行RT-PCR，得到1条预计856bp的片段，测序后所得序列于蓝氏贾第虫病毒基因同源性为98％。用α-32p标记的UTP测得该病毒具有RNA依赖RNA聚合酶活性。 蓝氏贾第虫病毒基因组全长cDNA构建 合成了能覆盖蓝氏贾第虫病毒基因组全长的相互重叠的6对引物，对我国蓝氏贾第虫病毒基因组进行RT-PCR，得到6个片段，克隆测序并经计算机分析表明该蓝氏贾第虫病毒基因组全长为6273bp，编码一个长度为886个氨基酸残基的壳蛋白和1057个氨基酸残基的融合蛋白，这两个阅读框被—1核糖体移码框分开，重叠处有220nt。5｀端有一个366bp的非编码区，3｀端长度为295个核苷酸。基因组中G+C占49.71％。该病毒与国外报道的标准蓝氏贾第虫病毒序列同源性为95％，编码氨基酸的同源性为90％。将覆盖基因组全长的 6对引物扩增得到的 6个片段在重叠处依次用 Pvu、Xho、Kpn、Nhe和Apa等内切酸酶切并连接到 ppolyZ／sfinot载体上形成全长 cDNA克隆。 蓝氏贸第虫病毒 GLVI sls－2322基因的表达 根据中国人源蓝氏贾第虫病毒(OLV全基因组测序结果，将其全基因组C DNDNA上编码蓝氏贾第虫病毒部分衣壳蛋白的 GLV1518毛322基因用 XhO酶切并克隆到原核表达载体 pET28C (江，构建了原核表达重组质粒p ETET2SC (＋y0w引8－2322。SO巳mOE分析表明，经if，mri诱导，32kDa蛋白基因在大肠杆菌BLZI（DE3）pLySS中得到高效表达，表达产物约占菌体总蛋白的68．172o／。以纯化的表达产物为抗原，免疫BalB／c小鼠，同时用病毒粒子免疫BalB／c小鼠，制备了中国人源蓝氏贾第虫病毒GLV1518－2322蛋白特异性抗血清。Western－blot表明该蛋白有良好的免疫原性。