论文部分内容阅读
目的通过检测注射外源性内脂素的高龄雌鼠卵巢组织血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）和内分泌腺性血管内皮生长因子（endocrine gland vascular endothelial growth factor，EG-VEGF）的表达来探讨内脂素对高龄雌鼠卵巢功能和卵子质量的影响，为临床促排卵中卵巢低反应患者的用药提供实验依据。方法将两组不同周龄段（12～16周，32～36周）的SPF级雌性SD大鼠每组各60只，每组内再随机分为两组。在诱导排卵的基础上，应用外源性内脂素的作为治疗组，将仅诱导排卵的一组作为对照组。第一步，诱导排卵，于发情期给予四组雌性SD大鼠腹腔内注射15IU孕母马血清促性腺激素，同时，治疗组予100ng/ml重组鼠内脂素。第二步，注射48小时后，向治疗组与对照组大鼠腹腔内注射50IU人绒毛膜促性腺激素（HCG）。第三步，立即将这些雌鼠和雄鼠进行单独交配。第四步，交配18小时后，颈椎脱臼处死雌鼠，无菌条件下取出双侧输卵管中的受精卵进行体外培养；取出双侧卵巢，右侧卵巢用甲醛固定，免疫组化检测微血管密度（MVD），左侧卵巢的一部分立即置于Trizol中，用于Realtime-PCR检测卵巢VEGF、EG-VEGF的mRNA表达，另一部分则用于Western Blotting检测VEGF、EG-VEGF的蛋白表达。实验数据采用SPSS17.0软件进行统计学分析，计量资料以平均数±标准差（x s）表示，采用单因素方差分析判断组间差异，两组间数据比较采用SNK检验，P<0.05认为有统计学意义。结果1年轻对照组平均合子数、卵裂数、卵裂率、平均胚胎数高于大龄对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），大龄治疗组高于大龄对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；而年轻治疗组、年轻对照组两组之间比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。2年轻对照组卵巢MVD、VEGF及EG-VEGF的表达水平高于大龄对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），大龄治疗组高于大龄对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；而年轻治疗组、年轻对照组两组之间比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论1诱导排卵的高龄雌鼠的平均合子数、卵裂数、卵裂率、平均胚胎数随周龄的增加而下降，提示高龄雌鼠生殖能力下降。2给予外源性內脂素后治疗组高龄雌鼠的平均合子数、卵裂数、卵裂率、平均胚胎数明显增加，提示外源性內脂素可能改善高龄雌鼠卵巢功能，提高其生殖能力。3给予外源性內脂素后高龄雌鼠卵巢MVD、VEGF、EG-VEGF的表达水平明显提高，提示外源性內脂素可能是通过促进卵巢血管的生成从而改善高龄雌鼠的卵巢功能和生殖能力。