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背景与目的:肺癌总所周知是最常见的癌症之一,对广大人类身心健康造成了严重危害。肺癌当中最常见的亚型是非小细胞肺癌(NSCLC),其占全部肺癌约85%。由于缺乏对特定生物标志物的早期筛查和诊断,而且早期肺癌临床症状不明显。所以,肺癌的诊断大多已经处于晚期阶段。肺癌患者的5年生存率仍低于10%。因此,努力寻找新的生物标记物并探索其生物学功能,为肺癌患者提供准确的早期诊断和个体化的治疗方案尤为重要。mi RNA是近些年来发现并研究的约19-22个核苷酸组成的非编码单链RNA。大量研究证明mi RNA参与诸多疾病的发生以及发展过程,特别是在mi RNA在各种类型肿瘤细胞的增殖、凋亡、转移和侵袭等生物学过程中发挥着或是促癌亦或是抑癌的作用。近年来,诸多研究已证实:诸多mi RNA如mi R-126、mi R-16-1可通过调控其靶基因参与肿瘤的发生发展。然而,mi R-939在NSCLC中的功能及其作用机制罕有报道。本文主要研究了mi R-939在非小细胞肺癌组织,癌旁组织及以及其典型细胞系中的表达情况,从而进一步评估其对细胞增殖,侵袭能力及上皮间充质转化(Epithelial-mesenchymal Transformation EMT)过程的影响,这不仅有助于我们了解非小细胞肺癌的临床的诊疗方案,同时也为开发新型抗肺癌基因药物,降低药物耐药性提供了有效的干预的靶点和理论依据。研宄对象及方法:1.标本收集:选取了50例胸心外科手术当中切除的原发性非小细胞肺癌组织以及相对应的癌旁组织病理标本。2.对mi RNA-939在非小细胞肺癌患者肺癌组织以及相对应的癌旁肺组织的表达水平进行相应检测,采用的方法为实时定量PCR(q RT-PCR),而后对其与患者临床病理特征的相关性采用统计学方法进行分析。3.qrt-PCR检测非小细胞肺癌细胞系及正常肺细胞系中mi RNA-939的表达水平。4.构建mi RNA-939 inhabitor及inhabitor NC,而后用这两种分别转染NSCLC细胞系(H1299,SPCA1,A549,H358)和正常肺上皮细胞系(16HBE),q RT-PCR验证转染效率。5.通过CCK8增殖实验检测mi R-939对NSCLC细胞增殖能力的影响6.通过Transwell侵袭实验检测mi R-939对NSCLC细胞侵袭能力的影响。7.采用Western blot实验检测EMT相关标志物E-cadherin和Vimentin的表达水平。8.结合前期实验结果和生物学在线的预测软件分析,筛选出mi RNA-939在非小细胞肺癌细胞中潜在的靶基因。9.将mi RNA-939和重组有TIMP2的3’UTR区序列的荧光素酶报告基因,24h后检测报告基因。10.实验研究TIMP2在mi RNA-939 inhabitor及inhabitor NC的表达情况,运用的技术为q RT-PCR和Western blot。结果:1.分析结果显示Mi RNA-939的表达水平在非小细胞肺癌组织和癌旁组织之间存在显著性的差异;mi RNA-939在非小细胞肺癌组织中表达相较癌旁组织显著增高,而且mi RNA-939的表达水平与患者的TNM不同分期、肿瘤的不同分化程度、淋巴结是否直接转移或远处转移有关,而与患者的年龄、性别和吸烟史无关。2.通过q RT-PCR方法检测NSCLC细胞系(H1299,SPCA1,A549,H358)和正常肺上皮细胞系(16HBE)中mi R-939基因的表达水平。分析结果显示,NSCLC细胞系(H1299,SPCA1,A549,H358)中mi R-939的表达水平明显高于16HBE,其结果支持临床分析结果。3.mi R-939的显著性差异表达与淋巴结的转移有关,所以为了在体外探索mi R-939对NSCLC细胞增殖,侵袭转移方面初步的调控机制,本研究将mi R-939抑制剂(inhibitor)和抑制剂对照组(inhibitor NC)分别转染肺癌细胞系。q RT-PCR方法用于验证其转染效率,结果显示:与对照组inhibitor NC相比较,在转染mi R-939 inhibitor的细胞中mi R-939表达显著减少(*P<0.05)。4.通过western blot实验发现:下调mi R-939后E-cadherin表达水平升高,Vimentin表达水平降低。该结果表明:下调mi R-939可抑制EMT过程。5.借助Target Scan和mi Rtarbase等在线的预测软件,对mi R-939进行生物信息学分析,预测mi R-939下游可能的靶基因。从而筛选出mi R-939在肺癌细胞中潜在的靶基因为TIMP2。Mi R-939通过结合TIMP2的3’-UTR发挥调控作用。6.Transwell侵袭实验结果显示,细胞穿过滤膜的细胞数明显下降,且差异具有统计学意义(P<0.05)。SPCA-1也有类似的研宄结果。以上的结果提示,TIMP2的表达沉默能抑制H1299和SPCA-1细胞的侵袭能力。推测mi R-939能够抑制肺癌细胞侵袭转移的作用机制可能与靶向抑制TIMP2有关。