肉鸡胫骨软骨发育不良(Tibial Dyschondroplasia,TD),是伴随着禽类的快速生长而出现的一种软骨代谢疾病。其主要临床特征初期为不愿意行走,采食量下降;进而表现为单腿或双腿跛行,共济失调;最后,随着患病程度的不断加深,严重者出现不能站立,甚至死亡的现象。病理学特征为:病鸡胫骨近端干骺面,生长板内血管生成受到扰乱,不能满足肥大区的软骨细胞所需营养,使得钙化区成骨受损,最后导致了白色软骨栓的形成;此外,TD的发生与大量的软骨细胞损伤有着直接的关系。大量的软骨细胞受损、相关蛋白分泌功能异常,最终导致了细胞外基质(ECM)不能及时、有序的降解,使得后期骨沉淀没有足够的空间而产生TD。随着研究的深入人们认识到:细胞外基质金属蛋白酶(MMPs)对TD的发生以及调控起着十分重要的作用。同时,细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(CD147)对MMPs的表达又有着有效的调控。在哺乳动物抗肿瘤的研究中,CD147可以通过调控MMPs的表达量,间接的调控细胞外基质ECM的含量,从而影响血管的生成以及肿瘤的转移。同时,在家禽TD的研究中,细胞外基质金属蛋白酶MMPs也可以作为衡量TD发病程度的重要指标。黄连素是一种重要的生物碱,可以提取于常见的中药黄连、黄柏、三颗针等当中。最近几年中,随着人们对黄连素研究的不断深入,其广泛的生物学功能逐渐被人们发现。除了传统的抗菌、抗病毒作用外,黄连素对脂质代谢的调控、消炎反应的影响以及抗肿瘤的作用等成为研究热点。在对小鼠关节炎作用中发现,黄连素可以在基因层面调控MMPs的表达,从而产生积极的治疗作用。这与TD的关联十分紧密。本试验旨在探究黄连素在福美双诱导的TD中,对CD147及MMP-9表达的影响,以及黄连素在福美双造成的TD肝脏损伤中的作用,进一步探明黄连素在TD中的作用机理。本试验采用1日龄AA肉鸡,通过饲料中添加福美双来诱导建立试验模型。由于饲料中停止添加福美双后,小鸡TD可以缓慢的自我恢复,所以将试验分为两部分,分别探究TD在发病和自我恢复过程中,通过口腔给予黄连素治疗后TD的恢复情况。试验通过观察各组肉鸡的生长状况,生长板结构形态,荧光定量PCR检测基因CD147及MMP-9的表达,CD147蛋白浓度的测定,以及肝脏SOD活性和血清中AST、AKP含量,来综合说明黄连素在TD中的作用,为黄连素对TD的治疗提供依据。试验结果显示:探究黄连素在TD发病组中作用时,与对照组相比,从第3天开始通过饲料中连续添加福美双,发病组中肉鸡在第3天出现食欲下降,第6天出现了典型的TD症状——跛行,且随着时间的推移,症状加重,生长性能严重受到影响,而黄连素发病治疗组中,小鸡跛行症状在第10天得到控制,随后TD症状逐渐缓解,生长性能得以改善;对生长板进行纵切后发现,发病组小鸡生长板有着较大白色不透明软骨栓,与自然发生的TD十分相似,而经过黄连素治疗后,软骨栓变小;进行病理学观察时发现,TD发病组中小鸡生长板肥大区软骨细胞大量死亡,且没有血管浸润,而治疗后,死亡的肥大细胞比例降低,出现新生的血管浸润在生长板肥大区;对生长板细胞进行处理后分析,TD发病组中基因CD147及MMP-9的表达量显著下降,低于发病治疗组(P<0.01,P<0.01);在用免疫蛋白印迹分析后发现,生长板软骨细胞中蛋白CD147表达量显著下降,而对照组和TD发病治疗组表达量基本一致;与对照组相比,TD发病组肝脏中SOD活性显著下降(P<0.01),血清中AST含量显著升高(P<0.01),AKP含量显著下降(P<0.01),TD发病治疗组与对照组差异不显著。探究黄连素在TD恢复组中作用时,与对照组对比发现,通过在第3到7天饲料中添加福美双后,TD恢复组小鸡和TD恢复治疗组小鸡都在第6天出现了典型的TD症状,停止福美双添加后,TD恢复组小鸡在第14天仍然有绝大部分不能站立行走,生长发育受到影响,而给予黄连素辅助恢复后,在第14天,大部分小鸡行走能力和生长发育有了显著提高;纵切生长板后发现,TD恢复组小鸡生长板有白色不透明软骨契存在,TD治疗恢复组小鸡生长板形态则基本与对照组相同;同时显微镜下观察,黄连素治疗恢复组小鸡生长板新生的血管浸润较TD恢复组明显增多而凋亡的细胞则较少;荧光定量PCR则显示,TD治疗恢复组小鸡基因CD147及MMP-9的表达较TD恢复组明显升高(P<0.01,P<0.01);Western blot分析发现,蛋白CD147的表达在对照组、TD恢复组、黄连素治疗恢复组没有明显差异;肝脏SOD活性,与对照组相比,TD恢复组显著下降(P<0.01),血清中AST含量显著升高(P<0.01),AKP含量显著下降(P<0.01),TD恢复治疗组与对照组差异不显著。结论:黄连素不论在TD发病过程中还是在恢复过程中,都有着显著的治疗和促进恢复的作用。