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目的自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)是一种肝脏特异性的慢性自身免疫性疾病。由于其发病机制未明,目前AIH的诊断标准和治疗策略缺乏核心针对性,仍需不断探索。肠道和肝脏在解剖生理上紧密相关,研究表明肠道黏膜屏障在多种肝病发病中起到重要作用,但在AIH中证据尚少。本研究通过酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测AIH不伴肝硬化患者血清D-乳酸(D-Lactate,D-LA)和二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)的含量,以评价其肠道通透性的改变。动物实验中,以1%浓度的葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)溶液建立小鼠肠黏膜屏障损伤模型,再利用刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)建立ConA急性肝损伤模型和1%DSS-ConA序贯模型,在序贯模型基础上使用双歧三联活菌保护和修复损伤的肠黏膜,观察并分析小鼠肠黏膜屏障在ConA诱导急性肝损伤发病中的作用。为阐释AIH发病机制和探索基于肠道的治疗新策略提供方向。方法1、AIH患者肠道通透性的改变:2016年1月至2017年11月于天津医科大学总医院消化科就诊的AIH患者中筛选48例不伴肝硬化者,以及入选健康对照者23例,收集其外周血样本,ELISA法检测血清D-LA和DAO浓度,评估分组间肠道通透性的差异。2、肠屏障在小鼠ConA诱导急性肝损伤发病中的作用:将雌性BALB/c小鼠分为空白组、DSS组、ConA组、DSS+ConA组和DSS+灌菌+ConA组。各组小鼠均喂养7日。有DSS干预的组别均日常饮用1%DSS水,其余则饮蒸馏水。DSS+灌菌+ConA组于饮水24h后开始双歧杆菌三联活菌胶囊生理盐水混悬液灌胃(剂量以双歧杆菌计:5.6×10~4 CFU/10g),每24h一次共6次,其余则生理盐水灌胃。有ConA干预的组别均于第7日终点前12h尾静脉注射ConA(剂量10mg/kg),其余则生理盐水注射。通过检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase,ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平以评价肝细胞损伤情况,肝脏苏木素伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色观察组织学改变,利用Knodell组织学活动指数评分系统评价肝脏炎症活动。结肠HE染色观察组织学变化,通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time RT-PCR,RT-qPCR)法检测结肠黏膜闭锁小带蛋白1(zonula occludens-1,ZO-1)和闭合蛋白(Occludin)的相对表达以评价肠屏障的干预结果。结果1、AIH患者肠道通透性的改变:与健康对照组相比,AIH组血清D-LA和DAO水平升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。2、肠屏障在小鼠ConA诱导急性肝损伤发病中的作用:(1)各组小鼠间终末体重、结肠长度差异均无统计学意义(P分别为0.817、0.257)。(2)ALT、AST水平:DSS组与空白组相比差异均无统计学意义(P分别为0.999、0.922);ConA组与空白组相比水平升高(P<0.05);DSS+ConA组水平高于ConA组(P<0.05);DSS+灌菌+ConA组水平低于DSS+ConA组(P<0.05)。(3)注射ConA的小鼠肝脏HE染色均可见炎细胞浸润和肝实质坏死,炎症活动度评分示DSS+ConA组高于ConA组(P<0.05),DSS+灌菌+ConA组有低于DSS+ConA组的趋势但是差异无统计学意义(P=0.139),而空白组和DSS组肝脏均未发现异常。(4)DSS组和DSS+ConA组小鼠结肠HE染色可发现上皮、腺体结构破坏和炎细胞浸润,而DSS+灌菌+ConA组结肠虽可见散在炎性浸润但是黏膜上皮层细胞结构基本完整,腺体排列和腺腔规格规整。空白组和ConA组结肠均未见异常。(5)结肠ZO-1及Occludin表达水平:与空白组相比,DSS组两者均下降(P<0.05),ConA组差异无统计学意义(P分别为0.734、1.000)。与ConA组相比,DSS+ConA组两者均减低(P<0.05)。DSS+灌菌+ConA组高于DSS+ConA组(P<0.05)。结论1、AIH不伴肝硬化患者血清D-LA和DAO水平较健康对照者升高,表明AIH不伴肝硬化患者肠道通透性增高。2、1%DSS喂养小鼠7天可引起远端结肠黏膜屏障损伤,但对肝脏无影响。急性ConA造模可引起明显肝损伤但对结肠黏膜屏障无影响。DSS引起肠黏膜损伤后可以加重ConA诱导的急性肝损伤的肝脏炎症。基于1%DSS-ConA序贯模型,双歧三联活菌可以通过保护和修复DSS引起的肠黏膜损伤,相对减轻ConA急性肝损伤的肝脏炎症程度。