目的:黑色素瘤具有低发病率高死亡率的特点,近年来其全球发病率逐年增高。对于早期黑色素瘤,多数患者可以通过手术切除获得较好的预后,但由于黑素瘤发病隐匿,且具有很强的侵袭性,很多发现时已发生转移,只能进行放化疗,而放化疗效果较差。近年来随着分子靶向治疗和免疫治疗的发展,黑色素瘤的预后大大改善,但随之出现的耐药使黑色素瘤的治疗面临新的挑战。因此,开发高效低毒的抗黑色素瘤药物是目前临床中急需解决的问题。近年发现黄酮类化合物,如芹菜素、木犀草素,在抗癌方面作用突出,可以显著抑制黑色素瘤细胞生长、增殖、迁移、侵袭、毛细血管生成及诱发凋亡,同时无明显毒副作用。桑辛素是存在于自然界桑白皮中的一种黄酮类化合物,既往研究证实其对胃癌和前列腺癌等肿瘤具有明显的抑制作用。然而,迄今还没有关于桑辛素对于黑色素瘤作用的报道。因此,本研究通过体内、体外实验探究桑辛素对黑色素瘤细胞的影响及作用机制,为探索新型抗黑色素瘤药物提供理论基础。方法:1.不同浓度桑辛素（0.001μM、0.01μM、0.1μM、0μM、1μM、10μM、20μM、40μM、60μM、80μM、160μM）处理黑色素瘤细胞系A375和MV3细胞24 h,采用MTT比色法检测细胞的IC50。2.采用细胞计数法、MTT实验分析不同浓度桑辛素对黑色素瘤细胞增殖的作用,Brd U免疫荧光观察桑辛素对细胞增殖的抑制情况。3.PI单染流式细胞技术及Western blot实验分析桑辛素对细胞周期的影响。4.流式细胞技术及Western blot实验检测桑辛素对细胞凋亡的影响。5.通过划痕实验、Transwell小室实验及Western blot实验分析桑辛素对细胞迁移和侵袭能力的作用。6.软琼脂克隆形成实验及小鼠体内成瘤实验分析桑辛素对黑色素瘤细胞系成瘤的作用。7.检测桑辛素对敲低p53后的A375细胞的细胞增殖、周期、凋亡、迁移与侵袭的作用。结果:1.MTT比色法分析得出,桑辛素在A375和MV3细胞中的IC50分别为4.634μM和9.7μM。2.细胞计数和MTT结果显示:桑辛素抑制黑色素瘤细胞增殖,不同浓度桑辛素处理后,细胞的形态发生了明显变化,细胞数量明显减少（P<0.05）;Brd U染色测定法还显示,与DMSO处理的细胞相比,5μM处理A375细胞,10μM处理MV3细胞24 h后,Brd U阳性细胞百分比显著下降（P<0.05）。3.通过PI单染流式细胞术检测细胞周期,结果显示,与对照组相比,5μM处理A375细胞,10μM处理MV3细胞24 h后,G2/M期细胞所占的百分比显著升高,差异具有统计学意义（P<0.05）。Western blot实验结果显示,与对照组相比,桑辛素处理组中p53、p21的蛋白表达水平呈浓度（A375细胞处理剂量为2μM、5μM、10μM,MV3细胞处理剂量为5μM、10μM、15μM）和时间（0 h、12 h、24 h、36 h）相关性升高（P<0.05）,Cyclin B1和CDK1的蛋白表达水平呈浓度和时间相关性降低。4.流式细胞仪分析显示:与DMSO对照组相比,在A375和MV3细胞中桑辛素处理组（2μM、5μM处理A375细胞,5μM、10μM处理MV3细胞）均出现明显的凋亡（P<0.05）。Western blot实验检测凋亡相关蛋白的表达结果显示:在A375和MV3细胞中,与DMSO组相比,桑辛素处理组的PARP下调,Cleaved-PARP（C-PARP）、Cleaved-Caspase3（C-Caspase3）上调,并且与剂量（A375细胞处理剂量为2μM、5μM、10μM,MV3细胞处理剂量为5μM、10μM、15μM）及时间（0 h、12 h、24 h、36 h）相关（P<0.05）。5.划痕实验和Transwell实验结果显示:与对照组相比,桑辛素处理后黑色素瘤细胞A375和MV3的迁移和侵袭能力明显降低,并与时间呈相关性;Western blot实验检测迁移侵袭相关蛋白的表达结果显示:在A375和MV3细胞中,与DMSO组相比,桑辛素处理组的Vimentin下调,E-Cadherin上调,并且与剂量（A375细胞处理剂量为2μM、5μM、10μM,MV3细胞处理剂量为5μM、10μM、15μM）及时间（0 h、12 h、24 h、36 h）有相关性（P<0.05）。6.软琼脂克隆形成实验结果显示:与对照组相比,桑辛素处理组单克隆大小明显变小,且克隆形成数目显著减少（P<0.05）;黑色素瘤细胞体内异种移植NOD/SCID小鼠模型实验结果示:桑辛素处理组的肿瘤体积和重量均显著低于对照组（P<0.05）。7.敲低p53结果显示:与DMSO和单独应用桑辛素组相比,敲低p53组在一定程度上恢复了桑辛素对A375细胞增殖、周期、凋亡、迁移和侵袭的影响。结论:桑辛素通过增加p53的表达,抑制黑色素瘤细胞增殖,导致细胞周期阻滞于G2/M期,诱导细胞凋亡,并降低细胞的迁移侵袭能力,作为一种黄酮类化合物,桑辛素具有潜在研究价值,有望成为新的抗黑色素瘤药物。