【摘 要】
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目的富血小板血浆(platelet rich plasma,PRP)是一种由浓缩在有限容积血浆中的血小板组成的制剂,其特点是血小板浓度比全血高4-6倍。PRP能够提供一种富含有生长因子的微环境,进而促进细胞增殖和迁移及骨组织的愈合。但是PRP在骨质疏松性骨折方面的研究较少,因此,本研究利用大白兔制动制作骨质疏松骨折模型,并在骨折断端应用PRP,运用大体组织解剖、影像学检查、细胞组织学染色等方法来验
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目的富血小板血浆(platelet rich plasma,PRP)是一种由浓缩在有限容积血浆中的血小板组成的制剂,其特点是血小板浓度比全血高4-6倍。PRP能够提供一种富含有生长因子的微环境,进而促进细胞增殖和迁移及骨组织的愈合。但是PRP在骨质疏松性骨折方面的研究较少,因此,本研究利用大白兔制动制作骨质疏松骨折模型,并在骨折断端应用PRP,运用大体组织解剖、影像学检查、细胞组织学染色等方法来验证并探讨同种异体PRP对骨质疏松性骨折修复过程的影响,进而为PRP在骨质疏松性骨折的临床应用提供相关理论支持。方法实验一:探究不同离心强度和离心持续时间对PRP提纯的影响。10只健康大白兔,耳中央动脉采血制备PRP。PRP制备采取二次离心法,探究离心强度和离心持续时间对PRP制备的影响,在两次离心时分别采用不同离心强度和离心持续时间。第一次离心强度为50g、100g、150g、200g、250g五个梯度,离心持续时间采取5min、10min、15min三个梯度。第二次离心的离心强度为300g、350g、400g、450g、500g五个梯度,离心持续时间采取5min、10min、15min三个梯度。流式细胞计数仪分别测量在不同离心强度和离心持续时间下所提纯血浆中血小板浓度。实验二:骨质疏松性骨折模型的制备。2.0-2.5kg大白兔24只,每笼2只分笼饲养,随机编号,分为实验组和对照组,实验组和对照组各12只。双侧前腿石膏固定4周,大白兔双侧前腿石膏固定4周后,去除石膏,于石膏固定前后分别用双能X线测量骨密度(Bone mineral density,BMD),以确保骨质疏松模型制备成功。制作骨质疏松性骨折模型,麻醉起效后双侧前腿桡骨截骨1cm,实验组在截骨断端注射PRP,对照组在截骨断端不注射PRP,术后常规饲养。在术后第4周、8周、12周取双侧桡骨,并通过大体组织解剖观察、影像学检查、苏木精-伊红(HE)染色、测量骨体积分数等方法来分析实验组和对照组骨折愈合情况。结果实验一:首次离心除200g与250g之间无统计学差异(P=0.085)以外,其余四组间均具有统计学差异(P<0,05);不同离心持续时间组间两两比较显示各组间有统计学差异(P<0.05)。第二次离心显示300g与350g之间无统计学差异(P=0.375),450g与500g之间无统计学差异(P=0.809),其余各组间具有统计学差异(P<0.05);从不同离心时间上看,5min与10min、5min与15min之间有统计学差异(P<0.05);10min与15min之间无统计学差异(P=0.073)。实验二:实验组和对照组石膏固定前后BMD值具有统计学差异(P<0,05),骨质疏松动物模型制备成功。从大体解剖可以看出,在第4周、第8周骨痂生长情况实验组要优于对照组,骨折愈合情况实验组要优于对照组;第12周实验组截骨处均已呈愈合态势,大体解剖样本实验组明显优于对照组。X线结果显示第4周、第8周、第12周实验组截骨处骨痂呈逐渐增加趋势,局部骨密度越来越高。第4周、第8周、第12周对照组骨痂虽然也呈逐渐增加趋势,但骨痂形成速度明显慢于实验组。HE染色结果:第4周病理切片结果对比,实验组大白兔桡骨截骨处增殖的软骨细胞较对照组多,骨折愈合情况更好;第8周实验组与对照组相比,实验组骨痂内软骨骨痂减少,出现大量的编织状骨痂,骨小梁较成熟;第12周实验组与实验组相比,实验组骨小梁相互之间连接性较好,骨小梁更为密集,,骨皮质厚度更大,骨折愈合情况更好。骨体积分数测量结果:第4周、第8周、第12周实验组和对照组骨体积分数具有统计学差异(P<0,05)。结论1.对于大白兔PRP制作,采取二次离心法制作PRP是简便可靠的,首次离心200g×15min,第二次离心450g×10min为大白兔全血制备PRP的最佳条件。2.通过第4周、第8周、第12周实验组与对照组骨折的愈合情况观察与分析,发现大白兔骨质疏松性骨折断端应用PRP能够促进骨折的早期愈合。
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