藏药甘青青兰（Dracocephalum tanguticum Maxim.）是唇形科（Lamiaceae）青兰属（Dracocephalum）多年生草本植物,分布于西藏、青海、四川及甘肃的干燥河谷河岸、田野、草滩或松林边缘等地,在民间主要用来治疗治疗肝炎、胃炎、头晕、黄水疮口不愈、出血等疾病症状。近年来研究发现甘青青兰具有许多药理作用诸如抗氧化、抗缺氧、抑菌、抗炎、抗病毒等。迷迭香酸（Rosmarinic acid,RA）是一种天然的水溶性酚酸类化合物,是植物中的一种次生代谢产物,在植物中广泛分布,主要分布于唇形科、葫芦科、紫草科中,迷迭香酸本身作为一种天然的抗氧化剂具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗抑郁等功效,在医药、食品保健、化妆品等领域上用途广泛。关于甘青青兰迷迭香酸生物合成途径上的关键酶报道较少,其生物合成途径由两条平行支路组成即苯丙氨酸代谢支路和酪氨酸代谢支路,C4H基因是苯丙烷代谢途径上的关键基因,是参与黄酮类、木质素等次生代谢物质合成的关键酶之一,C4H基因的克隆及功能验证对提高甘青青兰中迷迭香酸含量具有极为重要的意义。本研究以甘青青兰为材料,同源比对克隆出Dt C4H基因,Dt C4H基因长为2 004 bp的碱基序列中有206 bp的5’UTR、280 bp的3’UTR及1条长度为1 518 bp的CDS,编码505个氨基酸,其预测分子量（MW）大小约为57.9 KDa,理论等电点（p I）9.12,Dt C4H具有膜锚区域（Membrane anchor）、富含脯氨酸区域（Proline rich regions）、苏氨酸结合点（Threonine-containing binding）、血红素结合区域（Heme-binding）等典型C4H基因保守位点,预测该基因编码的蛋白存在信号肽,能引导蛋白质进行跨膜运输,q RT-PCR检测Dt C4H基因在甘青青兰各组织中的表达,结果显示该基因在甘青青兰根中相对表达量最高茎次之,与其他C4H基因在植物组织中的表达情况相近。酿酒酵母蛋白表达Dt C4H,体外酶活测定结果表明Dt C4H具有肉桂酸4-羟化酶活性。通过侵染甘青青兰叶片获得超表达及干扰表达的毛状根对其进行检测,结果显示Dt C4H超表达毛状根中迷迭香酸含量提高了1.1～1.7倍,基因表达量提高了1～8倍,干扰表达毛状根中迷迭香酸含量降低了24%～82%,基因表达量降低了50%～90%,上述研究结果表明,Dt C4H具有肉桂酸4-羟化活性,并参与了甘青青兰中迷迭香酸的合成。