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目的：通过靶向沉默缺氧诱导因子-1α（HIF-1α），观察人胰腺癌耐药细胞株Patu8988/5-Fu在氯化钴诱导化学性缺氧情况下耐药性的变化，探索胰腺癌的耐药机制及解决化疗耐药性的可能途径。方法：RT-PCR筛选针对HIF-1α基因的有效干扰片段通过慢病毒转染胰腺癌耐药细胞，将Patu8988/5-Fu细胞分为三组：①空白对照组(Blank)、②无义转染对照组(Lenti-NC-shRNA)和③稳定干扰转染组(Lenti-shRNA)。采用200μmol/L氯化钴CoCl2培养细胞诱导化学性缺氧模型, MTT法测定Patu8988/5-Fu细胞增殖活性和耐药性，JC-1荧光染色流式细胞仪分析线粒体膜电位变化。RT-PCR检测转染前后HIF-1α及多药耐药基因MDR1的表达情况；Western blot检测HIF-1α及多药耐药基因MDR1蛋白水平的表达情况。实验数据以SPSS19.0软件分析。结果：成功完成人胰腺癌耐药细胞Patu8988/5-Fu HIF-1α基因有效干扰片段的筛选、慢病毒转染和CoCl2化学性缺氧模型的构建及相关检测。RT-PCR结果显示慢病毒转染Patu8988/5-Fu HIF-1α基因的有效干扰片段为Wtl-mus-1202：5’-GGAGCTACCTTAAAGGGAATG-3’，5’-CATTCCCTTTAAGGTAGCTCC-3’，其对基因HIF-1α72h的抑制率为82%，满足实验需求；MTT提示在氯化钴浓度为200μmol/L作用时间为8h时对细胞的抑制率为①2.03%②3.72%③5.48%,组间无统计学差异(P>0.05); JC-1荧光染色流式细胞仪分析示线粒体膜电位200μmol/L CoCl2的作用下去极化呈在三组细胞均增加，分别为：15.7%、22.9%、41.7%,组内有统计学差异(P <0.05)，但组间无统计学差异(P>0.05)；结合MTT选择氯化钴浓度为200μmol/L对细胞作用8h作为化学性缺氧模型构建成功，MTT检测三组细胞缺氧后相对于缺氧前的耐药倍数分别为①1.95②1.72③1.55均有统计学差异(P <0.01)，相同培养条件下③组细胞较①②组细胞的耐药性低(P<0.01)。RT-PCR检测示：①②组细胞在常氧或缺氧条件下mRNA的表达水平组间无差异(P>0.05)，而③组细胞HIF-1α、MDR1的表达在缺氧或常氧培养条件下均较①②两组弱（P<0.01），三组细胞在缺氧后HIF-1α及MDR1的mRNA表达均较常氧培养时增强(P <0.01)；Western blot检测HIF-1α及多药耐药基因MDR1的蛋白表达示：①②在常氧或缺氧条件下组间无差异(P>0.05)，而③组细胞HIF-1α、MDR1的蛋白表达在缺氧或常氧培养条件下均较①②两组弱（P<0.01），三组细胞在缺氧后HIF-1α及MDR1的蛋白表达均较常氧培养时增强(P <0.01)，与RT-PCR检测结果相一致。HIF-1α及MDR1在细胞中的表达呈正相关(γ＝0.562,P<0.01)结论：氯化钴诱导的化学性缺氧引起的HIF-1α和MDR1表达增加参与了Patu8988/5-Fu获得性耐药的产生，靶向沉默HIF-1α可逆转胰腺癌耐药细胞Patu8988/5-Fu的化疗耐药性。