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链霉菌LA5菌株是从海南辣椒植株上分离得到的一株生防菌,对疫霉菌、镰刀菌、炭疽菌等多种植物病原真菌具有强烈抑菌作用,其胡萝卜发酵液对辣椒疫病、香蕉枯萎病和香蕉果实炭疽病等植物真菌病害具有良好的防治效果,其作用机理是产生抗生素,但菌株在胡萝卜培养液中的抗生素产生水平较低,筛选LA5菌株产生抗生素的适宜发酵培养基配方,优化摇瓶发酵条件,提高其抗生素产生水平,并分离纯化出抗生素,明确有效成分的分子结构,可为LA5抗生素的研发奠定基础。通过单因子试验方法对11个单因子进行筛选,明确了以葡萄糖作碳源最有利LA5菌株产抗生素,其次是蔗糖、麦芽糖和玉米粉,以黄豆粉作氮源最有利于LA5抗生素的产生,其次是蛋白胨、酵母粉、酵母膏和牛肉膏,加入Ca2+和Mg2+有利于LA5抗生素的产生。通过均匀设计试验方法对上述4个单因子进行配方优化筛选,建立了摇瓶发酵培养基配方筛选模型:Y=-5.7512 +0.5515X1 +0.7811X2 +26.6954X3 +26.8706X4 -0.0066X12 - 0.0115X22 -24.0747X32 -22.5914X42 -0.01302X1X2 -0.3516X2X4 -21.4559X3X4,据此模型推测出摇瓶发酵适宜培养基配方为:黄豆粉28.00g/L、葡萄糖13.78g/L、CaCO3 0.42g/L、MgSO4 0.28g/L。经摇瓶发酵实验证实此适宜配方的抑菌距离实测值为16.10mm,与理论值16.88mm偏差仅4.62%,证明模型是有效的。优化后的培养条件是:初始pH6.8、培养温度28℃、接种量5%、摇瓶装液量100ml/300ml、转速200r/min、发酵时间120h。通过链霉菌LA5菌株发酵液的预处理、旋转蒸发仪浓缩、有机溶剂萃取、反相柱过柱洗脱、硅胶柱过柱洗脱、TLC检测等实验研究,明确了LA5脂溶性抗生素分离纯化的技术流程。获得的抗生素粗品经过反相柱用甲醇水梯度洗脱,活性成分被富集在80%甲醇洗脱液中,然后通过葡聚糖柱分离,最后过正相硅胶柱,用石油醚/乙酸乙酯(5﹕5)洗脱,共从抗生素粗品中分离得到了6个单组分化合物。