【摘 要】
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为进一步探索环境(食物)对果蝇生殖选择的影响,即验证本组前期工作中发现的果蝇Est-6酯酶基因射精管调节区(Ejaculatory duct regulatory region,EDRR)局部缺失对果蝇交配行为的影响,本实验以黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)为研究对象,采用SLIC无缝克隆技术对腺相关病毒载体PAAV-ALSTR-IRES-EGFP进行重组改造,构建出PA
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为进一步探索环境(食物)对果蝇生殖选择的影响,即验证本组前期工作中发现的果蝇Est-6酯酶基因射精管调节区(Ejaculatory duct regulatory region,EDRR)局部缺失对果蝇交配行为的影响,本实验以黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)为研究对象,采用SLIC无缝克隆技术对腺相关病毒载体PAAV-ALSTR-IRES-EGFP进行重组改造,构建出PAAV-ESTed6-IRES-EGFP质粒,在该体系中绿色荧光蛋白与Est-6酯酶共同处于含有果蝇EDRR部分缺失的天然启动子下,然后借助显微注射技术将质粒注射于胚胎中,构建ESTed转基因果蝇,后续通过荧光检测、PCR验证及一代测序证明转基因果蝇的构建成功。然后分析CMA子代果蝇群体和子一代ESTed转基因果蝇群体之间的交配选择性以及两者间的EST-6酶活表达差异,证明果蝇EST-6基因的EDRR调控区发生部分缺失会提高EST-6的表达量,并进一步提高了果蝇的生殖选择性,进而导致果蝇的生殖隔离。研究结果如下:(1)利用新一代SLIC无缝克隆技术,将实验室原有PAAV质粒上的AlstR基因及其启动子synapsin替换为前期工作中发现的18代CMY果蝇的EST-6基因及EDRR调控区,同时经一代基因测序及序列对比验证,重组质粒构建成功。(2)重组质粒上报告基因增强型绿色荧光蛋白EGFP的荧光检测证明质粒成功转入并表达,ESTed转基因果蝇构建成功。(3)体外酶活测定结果表示转基因果蝇群体头部的Est-6活性要远远高于CMA果蝇群体。(4)通过CMA子代果蝇群体和子一代ESTed转基因果蝇群体之间的交配实验,我们发现产生了清晰可见的生殖选择性差异。
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