银耳芽孢多糖的结构表征、生物活性研究及产品开发

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银耳(Tremella fuciformis Berk)又称作白木耳,因其具有抗氧化、抗衰老及抗肿瘤等特性,经常被当作药用或者养生滋补食品。本实验主要以银耳芽孢发酵得到的胞外多糖为实验材料,采用乙醇沉淀、Sevage法脱蛋白、超纯水透析、DEAE-fast flow离子交换层析及Sephadex-G100凝胶过滤层析,分离纯化得到三种均一的胞外多糖TPF-1、TPF-2、TPF-3,分别对其进行结构分析、抗氧化活性测定及相关产品开发,主要研究结果如下:(1)通过ITS鉴定、培养筛选,从六株原始的银耳芽孢菌种Tyc63、Y11、Y2、Tr01、Tr21、Tr9901中,筛选出两株产多糖相对较高的菌种即Tyc63、Tr01,并确定了最佳的发酵周期为6天。(2)通过对Tyc63粗多糖分离纯化,得到三种精制多糖TPF-1、TPF-2、TPF-3,其中TPF-1为白色絮状物,TPF-2、TPF-3均为疏松的白色网状物。三者均无味,易吸湿,易溶于水,不溶于甲醇、乙醇、丙酮和正丁醇等有机溶剂,其高浓度水溶液呈粘稠状。(3)通过红外光谱分析,在样品TPF-1、TPF-2、TPF-3的红外光谱中具有糖类的特征吸收峰,可初步判断该样品是多糖类化合物;并且根据其在1100 cm-1—1010cm-1区域只出现2个峰,应为呋喃糖苷;其中TPF-1、TPF-2是ɑ-型多糖,TPF-3是β-型多糖。(4)通过GC-MS分析可知,TPF-1主要由岩藻糖、木糖、甘露糖、葡萄糖醛酸组成,几种单糖的摩尔比为9.25:23.4:16.05:37.1;TPF-2主要由岩藻糖、木糖、甘露糖、葡萄糖醛酸和半乳糖组成,其所占比例分别为1.78:9.55:12.63:128.59:13.91;TPF-3主要由鼠李糖、木糖、甘露糖、葡萄糖醛酸和半乳糖组成,比例为3.8:30.78:52.78:12.73:14.6。刚果红实验表明,TPF-1、TPF-3中含有三螺旋结构,而TPF-2中不含三螺旋结构。(5)利用GPC-RI-MALS测得TPF-1、TPF-2、TPF-3的重均分子量分别为5189kDa、171.6 kDa、661 kDa。(6)体外自由基清除实验表明,粗多糖和TPF-1、TPF-2、TPF-3都具有一定的抗氧化能力,但对几种自由基的清除效果均比VC标准品要差,样品浓度在1 mg/mL时,粗多糖对ABTs+自由基的清除率为27.08%,TPF-1、TPF-2、TPF-3的清除率分别为15.28%、44%、41.9%,对羟基自由基的清除能力,粗多糖表现出很好的清除效果,1 mg/mL时,Tyc63粗多糖的清除率达到42.5%,而精制多糖对羟基自由基的清除能力较弱。(7)利用胞外粗多糖开发出三种化妆品分别为:胞外多糖爽肤水、润肤乳及保湿面霜,并且通过实验证实,三种化妆品的细胞毒性极低,并且对UVB诱导损伤的HSF细胞有一定的保护作用。
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