【摘 要】
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虫茶原产于中国西南部,是我国独有的林业资源昆虫产品,传统上由当地农民精心制作。它由昆虫幼虫的排泄物组成,这些排泄物通常来自于以特定的植物性饮食喂养的特种昆虫,这种特殊昆虫通常被称为产虫茶昆虫。本文对贵州2种主要产虫茶昆虫紫斑谷螟和灰直纹螟的全线粒体基因组进行测定及系统发育分析。在实验室条件下对整个紫斑谷螟青钱柳虫茶生产过程进行了重组,以便从微生物组学角度了解这种罕见饮料,并在最终产品中追溯流行细菌
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虫茶原产于中国西南部,是我国独有的林业资源昆虫产品,传统上由当地农民精心制作。它由昆虫幼虫的排泄物组成,这些排泄物通常来自于以特定的植物性饮食喂养的特种昆虫,这种特殊昆虫通常被称为产虫茶昆虫。本文对贵州2种主要产虫茶昆虫紫斑谷螟和灰直纹螟的全线粒体基因组进行测定及系统发育分析。在实验室条件下对整个紫斑谷螟青钱柳虫茶生产过程进行了重组,以便从微生物组学角度了解这种罕见饮料,并在最终产品中追溯流行细菌的起源。此外,在分析过程中观察到肠杆菌科Enterobacteriacea细菌的富集,并通过补充分析进行了验证。本研究旨在揭示产虫茶昆虫紫斑谷螟取食青钱柳前后的微生物群组动态变化规律,探索商业虫茶产品中是否含有与人体健康相关细菌类群。另,深入了解产虫茶昆虫的线粒体基因数据可以提供更多关于其鉴定的信息。本文主要研究结果如下:1.产虫茶昆虫紫斑谷螟和灰直纹螟的全线粒体基因组测定及系统发育分析经高通量测序,紫斑谷螟Pyralis farinalis和灰直纹螟Orthopygia glaucinalis这2种产虫茶昆虫全线粒体基因组均编码37个基因,包括13个PCGs,22个t RNA,2个r RNA和1个A+T-rich区,其核苷酸组成均具有明显的AT偏向性。紫斑谷螟线粒体基因组序列全长15,204 bp,其mt DNA含有15个基因间隔区及13个基因重叠区。13个PCGs总长度为11,234 bp,可编码3,732个氨基酸。核糖体RNA基因的LSU和SSU长度分别为1,388 bp和802 bp。灰直纹螟线粒体基因组是一个环状分子,全长为15,229 bp,包含13处基因重叠和14处基因间隔。13个PCGs总长度为11,235 bp,可编码3,745个氨基酸。在r RNA基因中,LSU(16S)长为1,406 bp而SSU(12S)为814 bp。系统发育分析选取了来自13个蛋白编码区的13条参考序列,结果表明这2个种均与螟蛾科Pyralidae有紧密的聚类关系。2.紫斑谷螟消化青钱柳过程中的微生物群组动态变化为了从微生物组学角度对这种罕见饮料进行了解,在实验室条件下对整个生产紫斑谷螟青钱柳虫茶的过程进行了重组,并在最终产品中追溯流行细菌的起源。结果表明,每个生产阶段的细菌群落组成都是特定的,其中链霉菌科Streptomycetacea,Pseudonocaridaceae,肠球菌科Enterococcaceae 3个类群含有较高比例。虫茶中含有丰富的肠杆菌科Enterobacteriaceae细菌,其中很大一部分成分可以追溯到产生这种昆虫紫斑谷螟的中肠(13.2%)及其排泄物(43.8%)中,而最初用于虫茶生产的植物青钱柳Cyclocarya paliurus叶片只占最终产品中可追踪细菌的0.6%。此外,在分析过程中观察到肠杆菌科细菌的富集,并通过补充分析进行了验证。3.商业虫茶中嗜氧菌的分离和定量为了验证商业虫茶中可回收活菌,进行了培养实验,结果表明,在2.7×105±1.2×105cfu·g-1时,虫茶中存在大量的活菌,分离出的细菌包括从一种商业产品中回收的Bordetella petrii和Enterococcus spp.。通过一种综合方法,虫茶被证明是一个物种丰富的细菌群落,可以从不同的生产环节追溯到特定的植物和昆虫的微生物组成成分。此外,虫茶展现了独特的细菌图谱,并且含有几种被认为是食品污染物的细菌,但在其他饮品中还没有报道。由于活菌数量众多,虫茶中含有一种迄今未被描述的动态成分,可能会对人类健康产生影响。
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