【摘 要】
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【目的】研究微囊藻毒素(MC-LR)促肝癌过程中癌前病变组织p53、p21基因mRNA表达水平的变化以及癌前病变组织p53基因突变情况,为阐明微囊藻毒素致肝癌的分子机理提供依据。【
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【目的】研究微囊藻毒素(MC-LR)促肝癌过程中癌前病变组织p53、p21基因mRNA表达水平的变化以及癌前病变组织p53基因突变情况,为阐明微囊藻毒素致肝癌的分子机理提供依据。【方法】1.微囊藻毒素促肝癌过程中p53、p21waf1mRNA表达水平的变化1.1建立二阶段肝癌动物模型:以DEN作启动剂,MC-LR作促癌剂,并设立空白对照组和DEN对照组。1.2微囊藻毒素促肝癌过程中p53、p21基因mRNA表达水平的变化:RT-PCR内标法。取肝癌前病变组织100mg提取RNA,逆转录成cDNA ,采用25μl体系扩增p53、p21基因mRNA,琼脂糖凝胶电泳后在凝胶成像系统下拍照,用Image-Pro Plus图像分析软件对目的基因及内参物(GADPH)电泳条带进行积分光密度(integral optical density, IOD)测定,以目的基因与内参的积分光密度比值,作为半定量资料进行统计分析。2.PCR-SSCP银染法检测肝癌前病变组织p53基因的点突变DNA提取试剂盒提取实验大鼠肝癌前病变组织DNA,对p53基因高度保守区(第5、6、7、8外显子)进行PCR,取扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,银染检测点突变,并进行统计分析。【结果】1.微囊藻毒素(MC-LR)促肝癌过程中癌前病变组织p53基因mRNA表达情况:空白对照组p53mRNA与内参的积分光密度比值是0.9552±0.6635,DEN对照组p53 mRNA与内参的积分光密度比值是1.3696±0.6149 ,
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