论文部分内容阅读
[目的]
检测p16的3个外显子在宫颈鳞癌中扩增与丢失情况。并检测相应宫颈组织标本中p16在宫颈鳞癌中的蛋白表达情况。探讨p16在宫颈鳞癌中异常表达的可能机制。检测eIF4E在正常宫颈上皮、宫颈上皮内瘤样变(CIN)、宫颈鳞癌(SCC)中的表达,探讨eIF4E在宫颈癌发生发展过程中的意义和作用。
[方法]
对32例宫颈鳞状细胞癌石蜡标本进行切片和脱蜡,均用苏木素轻染色,在显微镜下找准正常组织(间质)和癌组织的部位,进行显微切割,分别取癌旁正常细胞和癌细胞,用商用试剂盒提取DNA。以p16的3个外显子的基因序列为模板设计引物,在反应体系中加入内参照GAPDH和目的引物进行双重PCR扩增检测。运用Imago J软件对宫颈癌组织和癌旁间质组织PCR扩增产物的电泳条带进行灰度分析,以二者的相对光密度值之比≥1.5倍为扩增、≤0.5倍为缺失的评判标准检测32例标本中p16的3个外显子扩增或丢失。应用免疫组织化学SP法检测32例宫颈鳞状细胞癌标本中p16的表达情况。按细胞着色情况将宫颈鳞状细胞癌中阳性病例分为低表达组和高表达组,然后分析p16低表达组和高表达组中,p16各外显子中扩增或丢失的情况。应用免疫组化SP法检测79例宫颈病变中e IF4E的表达情况,其中包括10例慢性宫颈炎,22例CINⅠ级,24例CINⅡ/CINⅢ,23例宫颈鳞状细胞癌。
[结果]
在32例宫颈鳞癌病变组织中,p16基因的第1、2、3外显子扩增率分别为28.1％(9732)、15.6%(5/32)、28.1%(9/32)。P16基因的第1、2、3外显子缺失率分别为34.4%(11/32)、21.8%(7/32)、15.6%(5/32)。具有一个以上外显子发生扩增或缺失改变为81.3%(26/32)。免疫组化结果显示:32例宫颈鳞癌病变组织中,p16阳性表达率为100%(32/32),其中高表达组65.6%(21/32),低表达组34.4%(11/32)。低表达组中,p16各外显子表现为扩增的分别为:27.3%(3/11)、9%q(1/11)、18.2%(2/11);高表达组中,p16各外显子表现为扩增的分别为:28.6%(6/21)、19%(4/21)、33.3%(7/21),p16各外显子发生扩增在高表达组和低表达组之间比较,差异无统计学意义(Fisher确切概率法,p＞0.05)。低表达组中,p16各外显子表现为缺失的分别为:27.3%(3/11)、9%(1/11)、18.2%(2/11);高表达组中,p16各外显子表现为缺失的分别为:38.1%(8/21)、28.6%(6/21)、14.3%(3/21)。16各外显子发生缺失在低表达组和高表达组之间比较,差异无统计学意义(Fisher确切概率法,p＞0.05)。免疫组化结果:按上述病例标本顺序(依次是宫颈炎、C1NⅠ、CINⅡ/Ⅲ、浸润癌),石蜡标本eIF4E中表达阳性率分别是0(0/10),22.7%(5/22),67.7%(16/24),87%(20/23),除了CINⅡ/Ⅲ和浸润癌组的eIF4E阳性表达差别无显著性外(x2检验,P＞0.05),其余各组与宫颈鳞癌表达差异均有统计学意义(x2检验,P＜0.05)。
[结论]
1.p16各外显子在宫颈鳞癌中的基因改变既有扩增又有缺失。本实验中由于病例数的限制,未能提供确切的证据表明p16各外显子的扩增或缺失与p16蛋白表达的直接关系,还需进一步研究。
2.81.3%病例(26/32)具有一个以上外显子扩增或丢失,提示p16基因水平的改变与宫颈癌发生发展关系密切。
3.p16在宫颈鳞癌标本中呈100%阳性,提示p16可能是宫颈癌的早期筛查和诊断的一个较好辅助诊断标记。
4.随着宫颈上皮病变级别的升高,eIF4E表达逐渐增强。eIF4E可能参与了宫颈癌的发生发展过程。