七鳃鳗补体分子FI蛋白免疫活性初探

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东北七鳃鳗(Lampetra morii)属于最原始的无颌类脊椎动物,是研究免疫起源与进化的重要模式生物。血清中FI分子属于补体成分,在补体经典激活途径、凝集素途径和旁路激活途径中均发挥抑制C3分子的重要作用。七鳃鳗FI(L-FI)基因开放阅读框1894bp,编码618个氨基酸,含有KAZAL结构域(kazal-type protease inhibitor module domain),SR结构域(scavenger receptor cysteine-rich domain),LDLr1,LDLr2结构域(two class a low-density lipoprotein receptor domain)和Tryp_SPc(trypsin-like serine protease domain)结构域。本文通过PCR扩增获取L-FI基因的开放阅读框(ORF),构建到原核表达载体p Cold I上,成功在大肠杆菌中表达L-FI蛋白并制备多克隆抗体,ELISA和Western blot检测制备的抗体特异性良好。利用半定量、Western blot和免疫荧光方法证明,L-FI主要表达在七鳃鳗的肝、肠和白细胞中,并且定位在肝细胞和白细胞的核与胞浆中。质谱、免疫共沉淀结果显示,七鳃鳗血清中,L-FI与L-C3蛋白相互作用。天然L-FI和L-C3清除实验得知,清除L-FI和L-C3血清组会抑制对靶细胞的杀伤。流式细胞术和激光共聚焦及细胞沉积实验证明,L-FI影响L-C3在细胞表面的沉积。通过q PCR结果确定,细菌刺激后L-FI和L-C3都呈现表达量上调趋势。本论文结果为七鳃鳗补体分子参与防御病原体感染的研究奠定了基础,为七鳃鳗免疫分子起源与进化提供了重要资料。
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