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本研究采用活化酯法制备氯霉素(Chloranmphenicol,CAP)免疫抗原,分别免疫家兔和Balb/c小鼠获得抗CAP抗血清,并用间接酶联免疫吸附检测法(ELISA)对抗血清效价进行了检测,分别建立了检测CAP残留的间接竞争ELISA方法,可用于检测鸡肌肉组织中CAP的残留量。 CAP免疫抗原(CAP-BSA)的偶联比率为8∶1,包被抗原(CAP-OA)的偶联比率为2∶1。 在以多克隆抗体建立的ELISA方法中,用方阵滴定法确定包被抗原最适包被浓度为1.7μg/ml,抗血清最高效价为1∶640000,抗血清纯化后最适工作浓度为1∶20000。采用间接竞争ELISA法建立检测CAP的标准曲线,线性检测范围为0.1ng/ml~36.45ng/ml,检测限为0.05ng/ml。以0.5、1、2.5、5ng/g的浓度添加时,鸡肌肉组织中的回收率为42.00%~92.80%,变异系数为4.76%~26.29%。 在以单克隆抗体建立的ELISA方法中,用方阵滴定法确定包被抗原最适包被浓度为0.85μg/ml,腹水最高效价为1∶10~8,纯化后最适工作浓度为1∶10000。采用间接竞争ELISA法建立检测CAP的标准曲线,线性检测范围为0.1ng/ml~25ng/ml,检测限为0.1ng/g。以0.5、1、2.5、5ng/g的浓度添加时,鸡肌肉组织中回收率为71.01%~127.86%,变异系数为2.68%~16.16%。 上述2种ELISA方法快速、灵敏、方便,满足了氯霉素残留检测的要求,适用于残留大规模的快速筛选检测。