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金雀花碱N-亚甲基-（5,7-二羟基-4’-甲氧基）异黄酮（CNF2）是由我们课题小组从中草药苦豆子中提取分离出来的,这是一种具有新颖结构的天然活性化合物。经前期的药效学研究证明,CNF2具有明显的抗肿瘤活性,并且可以抑制MDA-MB-231和4T1两种乳腺癌细胞迁移。为了进一步考察其成药性,本文主要测定了CNF2的基本理化性质,建立了HPLC生物样品的定量分析方法以及研究了CNF2在Sprague-Dawley（SD）大鼠体内的吸收和组织分布规律,最后对该化合物的成药性进行初步评价。本文的工作主要包括以下几个部分:1.CNF2的理化性质考察本文通过紫外可见分光光度法进行了CNF2的含量测定,测定CNF2在不同有机溶剂和不同PH缓冲液中的平衡溶解度。实验结果表明,CNF2易溶于丙酮、甲醇等有机溶剂,微溶于水,它在不同溶剂中的溶解度大小顺序为:丙酮>甲醇>乙醇>异丙醇>乙腈>正辛醇>乙酸乙酯>水;CNF2在酸性和弱碱性缓冲液中的溶解度较大,这说明该化合物易被人体的胃肠吸收消化,适合被开发成口服制剂。此外,还测定了CNF2的表观油水分配系数（log P）以及解离常数（p Ka）,结果显示CNF2的log P为1.24±0.08,p Ka为7.18。2.生物样品中CNF2的HPLC分析方法的建立与验证本文对生物样品的前处理以乙腈作为蛋白沉淀剂和提取剂,蛋白质去除含量达97%以上。HPLC色谱分离条件为:色谱柱:Hypersil ODS C18（4.6×250 mm,5μm）;流动相:甲醇和三乙胺磷酸盐缓冲液（p H=7.30±0.05）（48/52,V/V）,等度洗脱,流速为1 m L/min;柱温:35℃;检测器波长:290 nm;进样体积:20μL。本文建立的HPLC体内定量分析方法灵敏度良好,定量下限为0.4μg/m L,线性范围在0.4～40μg/m L之间呈良好的线性关系,相关系数为0.999,提取回收率范围在90%～96%之间,分析方法的精密度和准确度均在±15%以内,符合美国FDA指南的要求。该方法首次成功应用于金雀花碱N-异黄酮类衍生物在大鼠体内的血浆药代动力学和组织分布研究。3.CNF2在大鼠体内的药代动力学和组织分布研究本实验设计为SD大鼠通过灌胃（60 mg/kg）和尾静脉注射（6 mg/kg）两种途径给药后,在不同时间点采集眼眶静脉丛的全血进行药代动力学研究。通过建立并验证的HPLC分析方法测定不同时间点的血药浓度,绘制血药浓度-时间曲线。根据非隔室模型（Win Nonlin 5.2）获得血浆药代动力学参数,并通过计算公式获得绝对口服生物利用度。药代动力学参数统计如下:（1）灌胃给药:AUC（0-t）为2302.825±67.269μg/m L·min,AUC（0-∞）为2507.903±67.988μg/m L·min,MRT（0-t）为109.110±0.955 min,MRTinf为611.236±0.94 min,Tmax为15 min,Cmax为7.72±0.86μg/m L;（2）尾静脉给药:AUC（0-t）为3480.91±173.66μg/m L·min,AUC（0-∞）为3588.56±201.4μg/m L·min,MRT（0-t）为184.470±3.4 min,MRTinf为650.440±4.8 min,Cmax为12.43±2.47μg/m L。CNF2在大鼠体内的绝对生物利用度为6.6%。CNF2通过单剂量（60 mg/kg）灌胃给药于SD大鼠,分别在给药后5 min,15 min和40 min将大鼠摘眼球处死,并快速摘除心、肝、脾、肺、肾、胃、脑、肠、胰、肌肉、脂肪和子宫十二个器官组织,用生理盐水冲洗组织表面上的血液,然后用滤纸擦干,称量后与生理盐水混合进行匀浆处理,通过已建立并验证的HPLC分析方法测定上述组织中CNF2的浓度。结果显示,CNF2主要分布在胃、肠和肺组织中,其次为肝、脂肪、子宫和肾组织,少数分布在心和脾脏中,而在脑组织中无分布。4.CNF2的分子对接模拟及成药性评价本文通过Auto Dock Tools-1.5.6程序对化合物CNF2与人类表皮生长因子受体2（HER2）进行对接分析,利用ACD/Percepta软件基于定量构效关系（QSAR）预测CNF2的理化性质和ADME性质,再结合实验结果对CNF2的成药性进行评估。理论研究表明,CNF2与HER2结合的亲和力要强于阳性对照抑制剂SYR127063,这说明CNF2可能对HER2具有一定的抑制作用。同时,依据类药五原则筛选出CNF2具有一定的成药性。因此,CNF2可开发成具有特定结构和抗肿瘤活性的先导化合物。但是,实验数据表明CNF2具有较低的绝对生物利用度,这可能与CNF2的首过效应有关。