论文部分内容阅读
目的:建立糖皮质激素性骨质疏松模型,研究丹参素对青年大鼠峰值骨量和丹参素对大鼠糖皮质性骨质疏松的影响与机制,为研究抗骨质疏松中药新药奠定基础。方法:本研究采用对大鼠肌肉注射地塞米松的方式,成功构建出“病”、“症”结合的GIOP模型,通过测定大鼠全身、离体骨密度、生物力学检测、血清生化指标检测、HE染色观察骨组织结构来判定造模是否成功;丹参素对生长期大鼠峰值骨量的影响研究,使用6月龄雌性Wistar大鼠30只,随机分为丹参素组、雌二醇和正常对照组,每组10只;丹参素对大鼠糖皮质性骨质疏松影响研究,使用3月龄Wistar雌性大鼠40只,分为对照组、模型组、雌二醇治疗组和丹参素治疗组,每组10只,两次动物实验都是每两周称取一次体重,每月用DEXA检测一次大鼠全身骨密度,待各组间出现统计学差异时,将所有实验动物处死并取材,测定椎骨和股骨的离体骨密度、进行骨生物力学分析、胫骨近端不脱钙切片VG染色;ELISA法检测血清骨吸收指标CTX-1、TRACP 5b和骨形成指标BALP、OC的水平,来分析丹参素对糖皮质性骨质疏松的疗效。结果:1.本研究给于大鼠每周两次地塞米松注射液2.5 mg/kg肌肉注射,共注射4周能够造成大鼠糖皮质性骨质疏松。通过测定大鼠整体和离体股骨的骨密度,全身骨密度结果显示,模型组全身骨密度显著低于对照组(P<0.01);模型组离体股骨和椎骨骨密度结果都显著低于对照组(P<0.01)。股骨三点弯曲实验结果表明,模型组大鼠弹性模量和最大载荷显著低于对照组(P<0.01);椎骨压缩实验表明,模型组大鼠最大载荷和屈服强度显著低于对照组(P<0.01)。说明,地塞米松注射后的大鼠其生物力学性能明显低于正常组,结果与骨密度实验结果相一致。血清生化指标的结果显示,模型组OC和BALP含量明显低于对照组(P<0.01),说明模型组骨形成因子含量减少;模型组Tracp 5b和CTX-1含量明显高于对照组(P<0.01),说明模型组骨吸收相关因子含量增加,即骨吸收增加。HE染色后观察骨组织细微结构,发现模型组骨小梁数量、宽度、面积百分比都远低于对照组,骨小梁分离度远大于对照组。综上所述,从骨密度结果、生物力学检测结果、血清生化指标结果、HE染色后观察结果说明,GIOP模型建立成功。2.口服丹参素可以通过提高大鼠峰值骨量来预防骨质疏松。与对照组相比,丹参素组的全身及离体BMD、股骨和椎骨最大载荷均明显提高,差异有统计学意义(P<0.01),血清生化指标的结果显示,模型组骨形成因子含量减少,给药组骨形成因子增加;模型组骨吸收相关因子含量增加,给药组骨吸收相关因子减少。给药组大鼠骨小梁明显变多变密,与不脱钙切片的骨形态计量分析结果相一致。3.口服丹参素对大鼠糖皮质性骨质疏松具有防治作用,并且其副作用低于雌激素。模型组大鼠全身和离体的骨密度明显有所下降,与对照组有显著性差异,生物力学参数、骨组织形态计量学都有降低的表现,具体表现在骨小梁数目、骨小梁厚度明显减少,骨小梁分离度却显著增加。使用丹参素和雌二醇治疗后,其大鼠的骨密度、生物力学参数均与模型组大鼠有显著差异,血清生化指标显示丹参素和雌激素均能显著提高大鼠血清中OC和BALP的含量,同时显著降低血清中TRACP-5b和CTX-1的含量。结论:1.采用注射一定剂量的地塞米松可以造成大鼠糖皮质激素性骨质疏松症模型,并且操作简单、有效;2.口服丹参素可提高骨密度和改善骨组织微观结构,提高生长期大鼠的峰值骨量;3.口服丹参素可抑制大鼠糖皮质性骨质疏松症的骨吸收活性而提高其骨形成活性,从而显著减少骨量流失,预防骨质疏松的发生,并且其副作用较雌激素小。