细胞凋亡是当前生命科学研究中最热门的领域之一,哺乳动物细胞凋亡的机制已经有比较深入的研究,可是昆虫细胞凋亡仍有很多问题有待研究。本文对昆虫细胞凋亡有关方面进行了探讨和研究。1两种昆虫血淋巴抑制Sl-1细胞凋亡本实验采用DAPI染色、流式细胞仪、荧光定量分光光度法、Westorn blotting等方法检测了凋亡细胞形态学变化、细胞凋亡率、Caspase-3活性及细胞色素c(Cyt c)的释放,研究了甜菜夜蛾和棉铃虫血淋巴分别对放线菌素D诱导和病毒诱导的Sl-1细胞凋亡的抑制作用。采用分别含有不同浓度的甜菜夜蛾和棉铃虫血淋巴(1%、3%、5%)的Grace’s培养基(5%胎牛血清)处理Sl-1细胞1小时,然后用终浓度为200ng/ml的放线菌素D处理细胞,置28℃恒温培养箱中培养24小时,DAPI染色结果表明两种昆虫血淋巴均能抑制凋亡小体的形成,随着昆虫血淋巴浓度的增加,抑制效果越明显。流式细胞仪检测细胞凋亡率,结果表明昆虫血淋巴明显抑制了细胞的凋亡,昆虫血淋巴浓度与细胞凋亡率呈负相关。为了进一步证明昆虫血淋巴对细胞凋亡的抑制作用,我们检测了ActD诱导的Sl-1细胞凋亡中Caspase-3活性的变化及细胞质中Cyt c的变化。将细胞置于含5%甜菜夜蛾血淋巴和5%棉铃虫血淋巴的培养基分别培养1小时,再用放线菌素D(200ng/ml)处理Sl-1细胞24小时后,制备细胞裂解液成份,然后用人工合成的Caspase-3特异性荧光底物AC-DEVD-AFC进行酶切反应,荧光分光光度法检测结果表明两种昆虫血淋巴均能明显抑制Caspase-3的活性,并且甜菜夜蛾血淋巴的抑制作用比棉铃虫血淋巴的抑制作用明显。Western blotting检测细胞质中Cyt c的变化,结果表明在ActD诱导的Sl-1细胞凋亡中存在着Cyt c的释放,两种昆虫血淋巴对Cyt c的释放有明显的抑制作用,并且甜菜夜蛾血淋巴比棉铃虫血淋巴的抑制作用更明显。同时,用病毒处理细胞后检测Caspase-3活性,结果显示两种昆虫血淋巴同样抑制了Caspase-3的活性。这些结果表明,两种昆虫血淋巴不仅能够抑制放线菌素D诱导的Sl-1细胞凋亡,而且能够抑制病毒诱导的细胞凋亡。因此,昆虫血淋巴抑制细胞凋亡可能具有广泛性。2 AfMNPV诱导的Sl-1细胞凋亡中几种Caspases活性及其关系本实验以杆状病毒诱导昆虫细胞凋亡,检测了Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的活性及其关系,结果表明Caspase-8特异性抑制剂Z-IETD-FMK不能抑制细胞凋亡以及Caspase-3的活性,而Caspase-9特异性抑制剂Z-LEHD-FMK能够抑制细胞凋亡以及Caspase-3的活性。但是用荧光定量法,没有检测出Caspase-8及Caspase-9的活性。在凋亡的Hela细胞阳性对照组中,检测到了Caspase-3和Caspase-8的活性,可是并没有检测出Caspase-9的活性。在不同时间间隔下,用兔抗多克隆抗体进行western blotting检测,没有检测到凋亡细胞的Caspase-9样蛋白。上述现象尚需深入进行研究。