研究背景:冠状动脉粥样硬化性心脏病（coronary atheroscleroticheart disease，CHD）冠脉弥漫性、多支病变无法通过PCI治疗实现血运重建，现有药物无法改善这类心肌缺血。近年发现在成人外周血存在内皮祖细胞(endothelial progenitor cells，EPCs)，EPCs可归巢到缺血心肌局部，不仅参与缺血区血管新生，而且引发血管发生，通过移植EPCs可以很好治疗缺血性疾病。如何加强EPCs的动员并增加其数量增强其功能是EPCs移植的关键。养心通脉方治疗CHD效果显著，推测养心通脉方能改善EPCs数量和功能。　　目的:通过摸索养心通脉方改善体外培养的兔骨髓源EPCs线粒体活性干预作用的最佳药物剂量和干预时间，并观察养心通脉方在此干预条件下对EPCs的增殖、迁移和黏附功能的影响，为后续进行移植养心通脉方预处理的EPCs促进缺血心肌血管新生的相关实验研究打下基础。　　方法:利用密度梯度离心法，从骨髓获取单个核细胞(MNC)，并用内皮祖细胞专用培养体系将MNC诱导培养为EPCs，对细胞DIL-AC-LDL和FITC-UEA-I荧光染色鉴定，并计算双荧光染色阳性细胞率。利用CCK-8比色法观察养心通脉方含药血清对EPCs的线粒体活力的影响，并寻找养心通脉方含药血清对EPCs的线粒体活力干预作用的最佳药物剂量和干预时间。利用CCK-8法测定EPCs的增殖能力。首先建立CCK-8与EPCs反应的标准曲线。将EPCs随机分为治疗组、对照组，各组经预处理后酶标仪测450nm下OD值;利用Transwell迁移小室法测定EPCs迁移能力。治疗组和对照组细胞用培养液重悬计数后注入到Transwell小室上室，Transwell下室加培养液和VEGF(50ug/ml)。37℃、5％CO2温箱培养24h，刮去滤膜上面的未移动细胞，多聚甲醛固定滤膜下面的迁移细胞，吉姆萨染色后在倒置显微镜下观察计数迁移细胞;贴壁法观察EPCs黏附能力。消化搜集各组细胞，重悬后计数，细胞悬液接种到预先用FN包被的96孔板，培养4h后倒置显微镜下随机取5个视野(×200)观察贴壁细胞数。　　结果:(1)EPCs的培养及鉴定:原代培养第2天细胞开始贴壁，第3天形成集落，内有多量单个核细胞，第4天梭形细胞从集落中心向外周长出，第5天镜形成类似胚胎时期的“血岛”结构，第10天镜见集落内梭形细胞放射状排列，或者细胞首尾连接成环状结构，培养到第20天的细胞呈DIL-ac-LDL和FITC-UEA-I双荧光染色阳性。(2)成功建立EPCs与CCK-8标准曲线。养心通脉方药物浓度为10％时改善EPCs的线粒体活力作用最显著(P＜0.05);养心通脉方药物干预时间为96h时改善EPCs的线粒体活力作用最显著(P＜0.05);养心通脉方在上述干预条件下能明显增强EPCs的增殖、迁移和黏附能力。　　结论:一、本实验成功掌握了在体外培养骨髓来源的EPCs的关键技术，培养的EPCs稳定性强，纯度高，数量大且实验操作简单，可重复性强。二、养心通脉方能提高体外培养的兔骨髓源EPCs的活性，且这种作用具有剂量和时间依赖性。三、养心通脉方最佳量效和时效条件下能明显改善体外培养的兔骨髓源EPCs的增殖、迁移和黏附功能。