第一部分Axl在子痫前期患者及正常妊娠者EPCs中的表达目的检测Axl在子痫前期患者及正常妊娠者的EPCs中的表达方法1.分离并培养两组患者脐血中的EPCs;2.采用RT-PCR方法测定两组EPCs中Axl m RNA的表达;3.采用Western Blotting方法测定两组EPCs中Axl蛋白的表达。结果1.将脐带血分离出PBMCS(peripheral blood mononuclear cells)并培养。培养至第七天时,可见细胞呈集落样分布,称CFUs(clony-forming units),呈现中心为圆形细胞,外周为纺锤形细胞样的集落。2.子痫前期患者EPCs中的Axl m RNA(25.77±8.69 vs.1.55±0.67,P<0.05)及蛋白(17.00±6.36 vs.1.03±0.20,P<0.05)的表达量明显高于正常妊娠者的EPCs,且差异有统计学意义。结论Axl在子痫前期患者EPCs中的表达高于正常妊娠者。第二部分Axl抑制剂对EPCs功能的作用目的研究抑制EPCs的Axl信号通路之后,其细胞增殖能力、分化能力、迁移能力及粘附能力的改变,了解Axl在EPCs功能中所起的作用。方法1.用脐血分离培养出EPCs,将细胞分为实验组、阴性对照组、空白对照组。实验组培养基中加入Axl抑制剂(BMS777-607,Bio Vision,USA,已证实其对Gas6/Axl信号通路的抑制作用),浓度为5.64ng/ml,等体积的DMSO(BMS777-607的溶剂)加入阴性对照组的培养基中,而空白对照组培养基不做任何处理,各组EPCs边培养边进行各项细胞实验;2.采用CCk8方法检测抑制剂处理后的EPCs细胞增殖能力;3.采用Transwell迁移实验来检测抑制剂处理后的EPCs细胞迁移能力;4.采用细胞分化实验检测抑制剂处理后的EPCs细胞分化能力;5.采用细胞粘附实验检测抑制剂处理后的EPCs细胞粘附能力。结果1.各组细胞经处理后,进行CCK-8实验,发现实验组EPCs的增殖能力较空白对照组及阴性对照组差(0.97±0.06 vs.1.20±0.11,P<0.01;0.97±0.06 vs.1.18±0.05,p<0.05)且差异有统计学意义,而两个对照组间差异无统计学意义(1.20±0.11 vs.1.18±0.05,P>0.5)。2.各组细胞经处理后,进行细胞分化实验,发现实验组分化的细胞(21.80±4.33)(纺锤样)较空白对照组及阴性对照组(41.12±2.93,37.80±9.58)少且有统计学差异(21.80±4.33 vs.41.12±2.93,P<0.05;21.80±4.33 vs.37.80±9.58,P<0.05)),而两个对照组间的差异无统计学意义(41.12±2.93 vs.37.80±9.58,P>0.5);此外,统计分化细胞所占百分比发现,实验组分化细胞百分比较空白对照组及阴性对照组低,差异有统计学意义(12.02±2.18 vs.17.78±1.81,P<0.01;12.02±2.18 vs.16.36±2.03,P<0.05),而空白对照组及阴性对照组之间相比差异无统计学意义(17.78±1.81 vs.16.36±2.03,P>0.5)。3.各组细胞经处理后,进行细胞迁移实验,发现实验组的EPCs的迁移数目少于阴性对照组(50.35±15.48 vs.79.88±5.69,P<0.05),差异有统计学意义,而实验组与空白对照组之间以及空白对照组与阴性对照组之间的差异无统计学意义(50.35±15.48 vs72.40±6.24,P>0.5;72.40±6.24 vs.79.88±5.69,P>0.05);4.各组细胞经处理后,进行细粘附实验,发现实验组EPCs的粘附能力(62.90±6.43)较空白对照组(80.73±4.80)及阴性对照组(83.20±4.52)弱,差异有统计学意义(62.90±6.43vs.80.73±4.80,P<0.05;62.90±6.43 vs.83.20±4.52,P<0.01)。而空白对照组和阴性对照组之间相比差异无统计学意义(80.73±4.80 vs.83.20±4.52,P>0.5)。结论本研究表明,抑制Axl信号通路会减弱内皮祖细胞的增殖、分化、迁移、粘附功能。