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本研究构建结核分枝杆菌esat-6基因的原核表达重组质粒,在大肠杆菌中表达重组蛋白并对重组蛋白进行鉴定与纯化;构建结核分枝杆菌esat-6基因的真核表达重组质粒,在哺乳动物细胞VeroE6中瞬时表达以验证其表达能力,纯化重组质粒;以真核表达质粒pVAC-esat-6为DNA疫苗免疫动物,观察其在小鼠体内的免疫原性。为新型结核病疫苗的研究开发提供实验依据和指导。
研究从结核分枝杆菌H37Rv菌株中提取基因组DNA。从GenBank获得结核分枝杆菌esat-6基因DNA序列,设计合成原核表达PCR引物并引入酶切位点,PCR扩增esat-6基因。应用克隆技术构建pMD18-esat-6重组质粒;应用亚克隆技术构建esat-6基因的真核表达重组质粒pVAC-esat-6;用PCR和酶切方法鉴定重组质粒。