磺胺二甲嘧啶（Sulfamethazine，SM2），属于磺胺类药物（Sulfonamides，SAs）中应用比较广泛的一种，含有对氨基苯磺酰胺的典型结构，SM2抑菌谱广，见效快，且成本低廉，广泛应用于动物疾病的预防和治疗。SM2还有促进动物生长的作用，因此，常作为饲料添加剂在动物生长过程中长期使用。SM2的过度使用会造成其在动物源性食品中大量残留，严重危害人类健康，引起了世界各国广泛的关注。因此，欧盟各国也对相关食品中的磺胺类药物的残留制定了最高允许值，规定总量不得高于100μg/kg，单个药物不得高于25μg/kg。日本对食品中的SAs规定不得检出。2002年12月我国农业部公告第235号文件规定在所有食品动物的肌肉、脂肪、肝和肾中磺胺类药物最高残留限量为100μg/kg，并将磺胺二甲嘧啶列为兽药残留监控的重点。目前，检测SM2的方法有微生物法，物理化学法以及酶联免疫检测法（ELISA）等。其中微生物法检测速度较快，但灵敏性和特异性差，物理化学法则存在样品前处理繁琐，需要昂贵仪器及专业操作等特点。酶联免疫检测法具有灵敏、快速、高通量的特点，不需要配备昂贵的的仪器，比较适合基层大量样本的初筛。本研究采用重氮化法将磺胺二甲嘧啶与载体蛋白偶联，合成人工完全抗原及人工检测抗原，通过紫外扫描（UV）、SDS-PAGE和红外光谱扫描（IR）对人工合成抗原进行鉴定，确认偶联成功，偶联比分别为13:1和10.5:1。用制备的SM2-BSA人工完全抗原免疫BALB/c小鼠，获得了2株能稳定分泌抗SM2的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过鉴定，3A12杂交瘤细胞株的细胞培养上清液效价为1:5.0×10⁴，制备腹水的效价为1:4.0×10⁵；4H4杂交瘤细胞株的细胞培养上清液效价为1:2.5×10⁴，制备腹水的效价为1:2.0×10⁵。亲和力常数测定结果显示，K（3A12）=4.9×10⁹L/moL，K（4H4）=8.3×10⁸L/moL，两株细胞株均具有很好的亲和力。并进一步采用阻断ELISA测定2株细胞株的特异性，3A12的IC₅₀为1.4μg/L，4H4的IC₅₀为1.8μg/L，特异性很好。在ELISA检测方法初步建立的过程中，我们对反应体系中的各个环节进行了优化。确定了抗原的包被浓度为0.25mg/mL，抗体的工作浓度为1:2000，采用一步法代替二步法，使得反应时间缩短为20min，在这个反应条件下，标准品与工作抗体的最佳加入体积比例为100μL:20μL。通过体系优化确定了矫正曲线的动力学范围0.5μg/L⁴0.5μg/L，线性方程y=－0.283x+0.546，R²=0.993。灵敏度和最低检出限分别1.4μg/L和0.1μg/L。用初步建立的ELISA检测方法对尿、猪肉组织、牛奶、饲料样本进行了添加回收试验，并用仪器法和所购试剂盒进行了对比试验，结果表明该ELISA检测方法能够达到实际样品检测的标准。