乙型肝炎病毒(HBV)感染严重危害人类的生命与健康,现有的抗HBV药物主要为核苷类药物。该类药物在临床上对于抑制病毒复制,缓解病人症状起到了积极的作用,但仍存在不能彻底地清除病毒、停药易反弹、耐药性等主要问题。因此,从中草药中发现并研发具有自主知识产权的新型抗HBV药物是重要途径。前期实验首次发现中药地锦草体外具有抗HBV作用,其活性部位为EHE-2和EHE-3。本研究采用HepG2.2.15细胞模型指导地锦草分离纯化的方法,深入、系统地开展了地锦草抗HBV活性部位的化学成分研究,评价了黄酮类化合物的体外抗HBV活性,初步分析了黄酮类化合物的构效关系,进一步探讨了活性化合物的抗病毒作用机理。地锦草(Euphorbia humifusa Willd.)为大戟科大戟属植物,全草入药,主治菌痢、肠炎、咳血、吐血、便血、崩漏、外伤出血、湿热黄疸、乳汁不通、痈肿疔疮和跌打肿痛等。本研究通过各种色谱分离技术,从地锦草抗HBV活性部位分离得到40个单体化合物,运用MS,1D-NMR,2D-NMR,NOESY,CD和UV等波谱技术,鉴定了其中38个化合物的结构,分别为phyllanthusiin E methyl este(rEHE-2-3-1),短叶苏木酚酸甲酯(EHE-2-3-2),短叶苏木酚酸(EHE-2-3-3),1-O-乙基-3,6-O-(R)-六羟基联苯二甲酰基-(1C4)-β-D-葡萄糖苷(EHE-2-3-4),地锦草酮(EHE-2-3-5),芙芦草素(EHE-2-3-6),橡椀酸双内酯（EHE-2-3-7),1-(2’,3’,4’,5’-四羟基戊基)-6,7-二甲基-喹噁啉-2,3(1H,4H)-二酮(EHE-2-3-8),没食子酸(EHE-2-3-10),没食子酸甲酯(EHE-2-3-11),芹菜素-6,8-二-C-β-D-葡萄糖苷(EHE-2-3-12),7’’-乙基-地榆酸双内酯(EHE-2-3-13),(1R,9S,11R)-5(Z),7(Z)-二烯-6-羰基-12-羟基-丁香烷( EHE-2-3-14 ), 1-O-甲基-6-O-p-二没食子酰基-α-D-葡萄糖苷(EHE-2-3-15),1-O-乙基-6-O-p-二没食子酰基-α-D-葡萄糖苷(EHE-2-3-16),1-O-甲基-6-O-p-二没食子酰基-β-D-葡萄糖苷(EHE-2-3-17),(1R,8S,9S,11R)-5(Z)-烯-6-羰基-8,12-二羟基-丁香烷(EHE-2-3-18),地榆酸双内酯(EHE-2-4-1),短叶苏木酚(EHE-3-4-1),木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(EHE-3-4-2),木犀草素-7-O-(6’’-O-阿魏酰)-β-D-葡萄糖苷(EHE-3-4-3),芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(EHE-3-4-4),芹菜素-7-O-(6’’-O-没食子酰)-β-D-葡萄糖苷(EHE-3-4-5),木犀草素-7-O-(6’’-O-香豆酰)-β-D-葡萄糖苷(EHE-3-4-6),芹菜素-7-O-β-D-芦丁糖苷(EHE-3-4-7),芹菜素-7-O-β-D-芹糖(1→2)-β-D-葡萄糖苷(EHE-3-4-8),芹菜素(EHE-3-4-9),槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖(1→6)-β-D-半乳糖苷(EHE-3-4-10),槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷和槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷(EHE-3-4-11),鞣花酸(EHE-3-4-12),橙皮苷(EHE-3-4-13),短叶苏木酚酸乙酯(EHE-3-4-15),3,3’-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-葡萄糖苷(EHE-3-4-16),没食子酸乙酯(EHE-3-4-17),3,3’-二甲氧基鞣花酸(EHE-3-5-1),木犀草素(EHE-3-5-2)和槲皮素(EHE-3-5-3)。所得化合物中,7个新化合物:EHE-2-3-4,EHE-2-3-5,EHE-2-3-13,EHE-2-3-14,EHE-2-3-16,EHE-2-3-18和EHE-3-4-5;24个化合物为首次从该植物分得:EHE-2-3-1 , EHE-2-3-2 , EHE-2-3-3 , EHE-2-3-6 , EHE-2-3-7 , EHE-2-3-8 ,EHE-2-3-11,EHE-2-3-12,EHE-2-3-15,EHE-2-3-17,EHE-2-4-1,EHE-3-4-3,EHE-3-4-6,EHE-3-4-7,EHE-3-4-8,EHE-3-4-9,EHE-3-4-10,EHE-3-4-11,EHE-3-4-13,EHE-3-4-15,EHE-3-4-16,EHE-3-4-17和EHE-3-5-1。采用HepG2.2.15细胞模型,评价了黄酮类化合物的体外抗HBV活性,首次发现了4个抗HBV活性化合物(EHE-3-4-2,EHE-3-4-3,EHE-3-4-4和EHE-3-4-5)。化合物EHE-3-4-2体外主要对HepG2.2.15细胞中HBsAg分泌具抑制作用,IC50为20μg·mL-1(44.64μM);化合物EHE-3-4-3体外对HepG2.2.15细胞中HBeAg分泌的抑制作用明显,IC50为75.81μg·mL-1(121.49μM),对HBsAg分泌抑制率为18.6%(80μg·mL-1);化合物EHE-3-4-4和EHE-3-4-5体外对HepG2.2.15细胞中HBeAg、HBsAg分泌均具剂量依赖性的抑制作用,IC50分别为34.71μg·mL-(180.35μM)和16.27μg·mL-(137.66μM),75.75μg·mL-(1129.71μM)和36.90μg·mL-1(63.18μM)。初步的构效关系分析结果表明:黄酮类化合物结构中糖基数量对其抗HBV活性具有决定作用,表现为黄酮单糖苷>黄酮二糖苷,同时也决定了该类化合物的体外细胞毒性,表现为黄酮苷元>黄酮单糖苷>黄酮二糖苷;黄酮母核结构与化合物的抗HBV活性关系密切,呈现出芹菜素单糖苷>木犀草素单糖苷>槲皮素单糖苷;酰基取代的黄酮糖苷仍具有较好的体外抗HBV活性,表现为没食子酰基>阿魏酰基>香豆酰基。地锦草抗HBV活性成分研究的结果表明,通过对活性部位EHE-2和EHE-3的化学成分研究,分离鉴定了38个单体化合物(15个黄酮类、20个酚类、2个倍半萜类和1个生物碱类化合物),其中7个为新化合物,24个化合物为首次从该植物分得;通过黄酮类化合物抗HBV活性评价,首次发现了4个活性化合物,并初步分析了其构效关系。本研究发现了体外具有较好抗HBV活性的黄酮类化合物,针对活性化合物开展体内药效学研究,有希望成为抗HBV候选药物;该植物的活性部位富含黄酮类化合物,成分集中且体外具有抗HBV活性,开展活性部位的成药性研究,具有研制成中药五类新药的潜力。