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目的：1.研究可溶性环氧化物水解酶抑制剂(soluble epoxide hydrolase inhibitor sEHi) t-AUCB(trans-4-(4-(3-adamantan-1-yl-ureido)-cyclohexyloxy)-bensoic acid)干预对原代乳小鼠心肌细胞心肌缺血模型中内向整流型钾电流(IK1)幅度的影响。2.探讨t-AUCB调控微小RNA-1(microRNA-1miR-1)机制,明确miR-1参与P13K通路的调控。方法：体外部分：选取出生1天的昆明小鼠乳鼠,培养原代心肌细胞,分5组进行不同的干预：(1)空白对照组(Ctl);(2) micrONTM mmu-miR-1a-3p agomir (agomiR-1)转染组(agomiR-1);(3) agomiR-1转染+t-AUCB干预组(agomiR-1+t-AUCB);(4) micrONTM mmu-miR-1a-3p agomir negative control组(Neg Ctl);(5) agomiR-1转染+DMSO干预组(agomiR-1+DMSO)。最后以全细胞模式记录钾电流(IK1)。体内部分：1.8周雄性昆明小鼠分成5组：(1)饮用水+假手术组(饮用水+sham);(2)饮用水+心肌梗死组(饮用水--MI);(3) t-AUCB0.2mg/L+心肌梗死组(t-AUCB0.2mg/L+MI)；(4)t-AUCB1mg/L+心肌梗死组(t-AUCB1mg/L+MI)；(5)t-AUCB5mg/L+心肌梗死组(t-AUCB5mg/L+MI)。24小时后取出心梗后缺血区心肌,运用Western Blot检测缺血区心肌p-AKT、p-GSK3β的表达。2.8周雄性昆明小鼠,用含t-AUCB5mg/L饮用水喂养7天,建立心梗模型后以尾静脉注射转染agomiR-1或阴性对照物agomiR-1Neg Ctl,具体分组如下：(1)饮用水+假手术组(饮用水+sham);(2)饮用水+心肌梗死组(饮用水+MI)；(3)饮用水+心肌梗死组+agomiR-1组(饮用水+MI+agomiR-1)；(4)饮用水+心肌梗死+agomiR-1Neg Ctl组(饮用水+MI+Neg Ctl)；(5)t-AUCB5mg/L+心肌梗死组(t-AUCB5mg/L+MI)；(6)t-AUCB5mg/L+心肌梗死+agomiR-1组(t-AUCB5mg/L+MI+agomiR-1)。24小时后取出心梗后缺血区心肌,运用Western Blot检测缺血区心肌p-AKT、p-GSK3β蛋白的表达。3.8周雄性昆明小鼠,用含t-AUCB5mg/L饮用水喂养7天,建立心梗模型后以尾静脉注射或腹腔注射P13K抑制剂wortmannin,具体分组如下：(1)饮用水+假手术组(饮用水+sham)；(2)饮用水+心肌梗死组(饮用水+MI)；(3)t-AUCB5mg/L+心肌梗死组(t-AUCB5mg/L+MI):(4)t-AUCB5mgL+心肌梗死+wortmannin0.3mg/kg(尾静脉注射)(t-AUCB5mg/L+MI+0.3W[尾])；(5)t-AUCB5mg/L+心肌梗死+wortmannin0.3mg/kg(腹腔注射)(t-AUCB mg/L+MI+O.3W[腹腔])。24小时后取出心梗后缺血区心肌,运用Real-time PCR检测缺血心肌KCNJ2,GJA1mRNA的变化。结果体外部分：1.所测电流的Ⅰ-Ⅴ曲线随着电压增加,其电流偏向于X轴,符合内向整流型钾电流的特点。2.在-100mV,正常对照组的IK1电流密度为-4.62±0.24pA/pV。3.使用miR-1激动剂agomiR-1200nM转染心肌细胞以模拟心肌缺血状态,在-100mV时,IK1电流密度为-0.05±0.06pA/pV,与正常对照组相比明显减小,差异具有显著性(n=6,p<0.05)。4.使用miR-1激动剂agomiR-1转染心肌细胞48小时后再使用10μm的t-AUCB干预心肌细胞,在-100mV时,IK1电流大小为-2.71±0.12pA/pV,与miR-1过表达组相比,IK1电流密度显著增大,表示药物干预具有统计学意义(n=6,p<0.05)。5.使用agomiR-1NC干预组,在-100mV时,IK1电流大小为-3.94±0.27pA/pV,与正常对照组相比无统计学差异(n=6,p>0.05)。6.使用miR-1激动剂agomir miR-1200nM转染心肌细胞48小时后再使用DMSO干预组,在-100mV时,IK1电流密度为-0.16±0.04pA/pV,与miR-1过表达组相比无统计学差异(n=6,p>0.05)。体内部分：1.饮用水+MI组的p-AKT、p-GSK3p表达水平较饮用水+sham组明显降低,差异具有统计学意义(n=6,p<0.05)。2. t-AUCB能够浓度依赖性地增加心梗后缺血心肌中p-AKT、 p-GSK3β表达水平,差异有统计学意义(n=6,p<0.05)。3.尾静脉注射miRNA-1激动剂agomiR-1后p-AKT、p-GSK3β水平进一步下降,5mg/L t-AUCB能够拮抗agomir miRNA-1的上述作用,差异有统计学意义(n=6,p<0.05)。4. t-AUCB5mg/L干预后能使小鼠心脏缺血区心肌组织KCNJ2. GJA1mRNA的表达量明显增加,差异有统计学意义(n=6,p<0.05)。尾静脉注射或腹腔注射PI3K抑制剂wortmannin能拮抗t-AUCB处理使小鼠心脏缺血区组织的KCNJ2、GJA1mRNA表达增加的影响(n=6,allp<0.05)。结论体外部分：1.miR-1过表达时IK1电流密度明显减小。2. t-AUCB能逆转miR-1过表达所致的IK1电流密度的改变。结合前期证实：t-AUCB通过调控miR-1作用于靶基因KCNJ2而引起IK1电流的改变。体内部分：1.心肌梗死后小鼠缺血区心肌组织的p-AKT, p-GSK3(3表达下降。2. t-AUCB能够浓度依赖性地上调缺血区心肌组织的p-AKT, p-GSK3Iβ3表达。3.miR-1过表达试剂agomiR-1通过尾静脉注射能使小鼠心脏缺血区组织的p-AKT, P-GSK3β表达进一步下降,而t-AUCB能够拮抗miR-1过表达所引起的上述改变。4. t-AUCB5mg/L干预后能使小鼠心脏缺血区KCNJ2、GJA1mRNA的表达量明显增加,而使用PI3K抑制剂wortmannin尾静脉注射或腹腔注射后能拮抗t-AUCB所致上述mRNA表达的改变。结合前期证实：t-AUCB经miR-1调控PI3K/AKT通路发挥抗缺血性心律失常作用。