川牛膝枝枯病病原鉴定及生物学特性研究

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川牛膝枝枯病是近年来在四川川牛膝种植区普遍发生的一种新病害。本文首次系统地研究了川牛膝枝枯病的症状、病原物种类鉴定、菌株多样性的电泳分析、生物学特性和室内药剂筛选。研究结果如下:1.病害的症状及病菌的种类鉴定川牛膝枝枯病主要为害枝条和茎,也可危害叶片。枝条和茎发病初期呈现水浸状斑点,后向上、下和环茎扩展为长约3~20mm不规则形或长形暗褐色病斑,导致枝上部枯死。病斑常发生于分枝处,茎部易折断,病斑表面散生或密生小黑点(分生孢子器)。叶部发病多从边缘或尖端出现水浸状斑点,后扩大为暗褐色、近圆形大斑,病斑边缘与健部无明显界限;病部散生黑色小点(分生孢子器)。以传统的形态分类为基础,辅以分子生物学技术,通过对病原菌形态特征、培养性状观察和rDNA-ITS序列分析,按照真菌分类依据,川牛膝枝枯病菌为茎点霉属的一个新种,依据Phoma属定种的原则,将其定名为:Phoma Cyathula。病菌分生孢子器散生或聚生,初埋生于表皮下,后突破表皮,孔口外露,直径为60~360μm,高约50~190μm,球形至扁球形,器壁褐色,膜质;分生孢子无色,单孢,椭圆形、圆柱形、纺锤形或梨形,中间常含有一个油球,分生孢子大小为3~12.5μm×1.25~5μm。2.川牛膝枝枯病菌的生物学特性研究用二个菌株,测定了温度、pH、光照、C、N源和营养条件等对病菌生长、产孢和孢子萌发的影响。病菌生长和产孢的温度范围为10~30℃,菌丝生长最适温度为25℃,产孢最适温度为20℃;对碳源的利用上,单糖、双糖优于多糖;对氮源的利用以有机氮最佳;在pH5~11内菌丝均能生长和产孢,最适为pH5~7;在PDA、燕麦片、10%+PDA、20%+琼脂4种培养基上菌丝生长较快,在甘露醇琼脂培养基上产孢量最大;二个菌株对光照均不敏感,在全黑暗条件下产孢量均为最大。病菌分生孢子在无菌水中萌发率低,加入糖分或寄主汁液可显著提高孢子的萌发率。在10~30℃下分生孢子均能萌发,适宜温度范围为20~25℃;分生孢子萌发的临界RH为93%,萌发率随RH升高而上升,100%+水滴中萌发率最高。pH 5~8适宜孢子萌发和芽管伸长。分生孢子对光照敏感,在全黑暗条件下孢子萌发率和芽管长度均最大。病原菌菌株1、2菌丝的致死温度分别为51℃、49℃,分生孢子的致死温度均为57℃。3.川牛膝枝枯病菌多样性的电泳分析菌体可溶性蛋白、酸性磷酸酯酶及酯酶同工酶酶谱结果显示,同一地区培养性状有差异的菌株间其谱带有一定差异,这表明种内存在着异质性。这种差异必然给利用菌体同工酶谱和可溶性蛋白电泳图谱作为分类手段带来了复杂性。我们初步认为可以把那些共有的酶带看作是该种的标志性酶带。4.药剂对川牛膝枝枯病菌的毒力测定采用药皿法和玻片萌发法对多菌灵、甲基硫菌灵、代森锰锌、百菌清、烯唑醇五种杀菌剂进行了室内筛选,测定了它们对川牛膝枝枯病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用。结果表明:多菌灵对川牛膝枝枯病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用最强;甲基硫菌灵、烯唑醇的抑制效果较好,百菌清再次,代森锰锌抑菌效果最差。
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